兰科花卉的组织培养.ppt

滨 州 职 业 学 院 第十章 兰科花卉的组织培养 目的要求： 掌握百合生物学特性和快速繁殖 方法； 掌握兰科植物组培的大致过程； 掌握胡蝶兰花梗组培的方法。 第一节 百合的组织培养 全世界已发现百合约89余种，主要分布地区是中国、日本、北美和欧洲等温带地区。 北美百合协会将百合园艺品种划分为10个种系，观赏栽培的主要是4个种系，即亚洲百合杂种系；茶香百合杂种系；东方百合杂种系；麝香百合杂种系。株形端正，花色清白给人以清纯、高雅的印象，是切花中的佳品。 我国近年来，昆明、上海、深圳的百合切花生产发展较快，已形成三大生产基地。目前国内切花栽培的百合大多是亚洲型，主要从荷兰、日本引进，经过几年的栽培试验，已筛选出一批适合我国生产的品种。 一、形态特性和生物学习性 百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径5~8cm，白色或黄白色，茎高30~90cm，直立，叶多而散生，披针形，光滑。花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。 百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。 二、繁殖方法 1.分球 百合老鳞茎(母球)生长过程中，于茎轴上逐渐形成小鳞茎，称茎生小球，经一年栽培，可分生1~3个甚至7~9个小球，适当深栽及摘除花蕾，均有助于子球发生，小鳞茎待明春播于苗床，大者1年，小者培养2~3年可当种球。 2.鳞片扦插 取成熟健壮的老鳞茎，阴干数日后剥下鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，温度以20~25℃为适，一般8~9月插，经2~4个月生根发叶，并在鳞片基部生长出小磷片，基质含水量在60％~ 80％，前期高水分，后期低水分，过分湿润易腐烂。为防止病菌感染，应尽量除去外层鳞片，1片鳞片可获50～60个子球，自鳞片扦插、生根、发芽至植株开花，一般需2~3年。 三、百合的组织培养 百合的组织培养繁殖自20世纪70年代后期开始，日本人以叶片为外植体诱导出大花卷丹的小植株，我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完整小植株。80年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交的新品种。 1.花器的组织培养 (1)取材和灭菌 采取开花前数日的花蕾。花蕾的表面用酒精灭菌，再在酒精灯上灼烧数秒钟，以后放在无菌培养皿内剥开花蕾，花丝，子房，花柱等分别切取3～5mm长，接种到培养基上。也可用花瓣和萼片培养。 (2)培养基及培养条件 采用MS，KC等培养基，蔗糖浓度以7.0％为适，这样发芽和子球形成率可达90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保温 20℃。 培养条件 花柱、花梗、茎段等用MS+IAAl+BA0．2培养基， 叶片用MS+NAAI+BA0．1； 分化植株时，MS+NAA2+IBA0．4+Kt0．05，培养基内均加蔗糖3％和琼脂0．7％，pH值5.8~6.5。 (3)生长情况 花器部位 从百合花器不同部位的培养来看，以花丝的部位为好，成活率很高，发芽较多，再是子房和花柱部分。可从各部位发芽，形成子球，通常是经过两个途径，一个是从切中处形成愈伤组织，以后再发芽；再是从切口直接产生芽。麝香百合花器培养得到的植株，生长约6个月即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花较大，且全株无病毒症状。 2.鳞片组织培养 百合鳞片等培养，对于扩大培养材料来源，加快繁殖速度和培养得到无病毒苗等皆有重要意义。 初代培养： 由于其鳞茎材料都生长在土中，受土壤微生物的影响，所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，可应用几种消毒剂并用的方法。取0．5cm2鳞片小块接人MS+2，4-D1+IAAI+Kt0．5诱导培养基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光强1200Lx条件下培养。 接种后2周，即有98％左右的鳞片切块在近轴面或边缘上有淡黄色的不定芽原基呈环状突起，多数每块上有2~4个，这些不定芽原基继续生长4周后，可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，在小鳞茎基部发生一些粗壮的根。将幼苗切成1.5~2cm长的片断，接种到诱导愈伤组织的培养基上。3周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一团团淡黄色的愈伤组织。 继代培养 （分化培养）时，可用MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培养基。将愈伤组织转移到分化培养基上，10周后，愈伤组织逐渐膨大，分化出许多大小不等的鳞茎，并在小鳞茎的基部长出许多粗壮的根。有少数的小鳞茎中间可长出绿芽。将小鳞茎分离出以后，留下的愈伤组织转移到相同的新鲜分化培养基上，一段时间后仍能分化出小鳞茎。 试管苗移栽时首先应把根部的培养基清洗