用菌产业的分子生物学技术应用进展.pdf

农业食用菌产业的分子生物学技术应用进展 刘 晓 1孙 涛 1杨 鹏 2万鲁长2宫志远2刘兆辉1 姚 强 1赵军胜1 1山东省农业科学院，济南2501002山东省农业科学院农业资源与环境研究所，济南250100 摘要：对近年来在农业食用菌产业中分子生物学技术取得的成果和进展进行了综述，着重阐述了DNA分 子标记、分子转化、基因克隆等技术在现代食用菌产业研究上的应用。 关键词：分子生物学技术；现代食用菌产业；分子标记；分子转化；基因克隆 S646 A 上 海 农 业 学 报 19 Muraguchi【91用RFLP标记将灰盖鬼伞(CD∥i，z“s 上。sagawa等㈠o]对金顶侧耳(Pfe“rDf“s 将双孢蘑菇、香菇和亚侧耳与侧耳分开。沙涛等【120利用IGSl一RFLP对滇产与日产松茸进行比较分析，发 信息在部分物种中不明显，进行RFLP分析所需的相应的DNA样品量要足够大，若只检测几个探针则成 本较高。 1．3 characterized SCAR(SequenceampIifiedre2ion) 鉴别出来．可以实现由非特异性分子标记到特异性标记的转化，也是一种有效可靠的鉴定菌株新方法。 吴学谦等u3。对香菇菌株162和‘申香10号’特异的ScAR标记。能准确鉴定出这两个菌株的真伪。唐利 华等。14一将两个黑木耳栽培菌株173和186进行SCAR标记，以鉴定黑木耳栽培菌株中的同物异名现象。 张美彦等u列以香菇保藏菌种‘庆元135’以及新鲜子实体用已获得的SCAR特异引物对单核进行扩增，能 够证明其特异SCAR标记是稳定遗传的。 SCAR标记的关键是选择合适的分子标记，相比RAPD扩增过程中较高的错配率而导致的较低的转 化成功率，SRAP和ISSP分子标记转换得到的scAR标记成功率要高的多。 1．4 AFI．P(AmplifiedfragmentlengthpoIymorphism) 即利用限制性酶切产生的DNA片段作为扩增的模板，根据扩增片段长度的不同检测出多态性。辜运富 等¨6一对15株双孢菇品种的种内多态性进行AFLP指纹图潜及相似性聚类分析，证明虽然种内相似性程 度较高，但是利用AFLP标记技术仍然能够揭示双孢蘑菇品种内的遗传多态性。郑林用¨71等对不同药用 灵芝的扩增酶切片断AFLP分析，可将伞部供试材料区分开。AFLP的效率高、分辨率高、稳定性好同时 对DNA的纯度和内切酶的质量要求很高，技术费用昂贵。 1．5 lSsR(Inter-simpIesequencerepeat) DNA为引物以引起特定位点退火，扩增出与锚定引物互补的间隔不太大的DNA片段。秦莲花等¨81结 合ITS与ISSR技术对香菇16个菌株进行遗传分析用作香菇生产菌株鉴别，是快速准确鉴别香菇生产菌 株的分子水平依据。马志刚一钆等基于形态特征、ISSR和RAPD分析对侧耳属近缘种进行研究，分析了 ISSR在侧耳属的分子系统发育学中可行性。ISSR具有通用引物，不需要获得SSR两侧的单拷贝序列， 揭示的多态性较高。检测非常方便。 1．6 ERIc(EnterobacteriaIintergenicconsensus) repetitive 向引物来扩增两个相邻的ERIC保守序列之间的区域。温亚丽等L2叫首次将ERIc技术应用于食片j菌领 域，区分开黑木耳和毛木耳。证明ERIC方法町以在菌株水平上进行鉴别。何培新等心¨对22个平菇菌株 行遗传分析选育出新的赤芝新品种。ERIC方法的扩增产物独特、图谱稳定、重复性好，其局限性主要集 中在样品和PcR反应本身比3|。 1．7 SSR(Simplesequencerepeat) SSR是常用的微p星标记，通过PcR扩增出单个微卫星位点，根据扩增产物在长度上的变化而产生 长度的多态性。肖扬等124’251对香菇进行了SSR分析，建立了稳定的香菇SSR技术体系并筛选出有效的 扩增引物，为SsR标记在香菇上的研究奠定r分子生物学基础。SSR标记是共显性，具有多等位基因的 特性，提供高信息量，揭示的多态性高，但是其开发费用相当高。 2 遗传转化 食用菌的遗传转化研究和其他真菌相比开始得较晚，直到1991年ChallenMP等利用PEG法把外 源DNA导入双孢菇的原生质体内获得转化子。 2