猪链球菌分离株的病原学特性.pdfVIP

河北科技师范学院学报 第21卷第4期，2007年12月 Journal 0f Hebei Normal University of Science＆Technology Vo1．21 No．4 Dec．2007 猪链球菌分离株的病原学特性 吴建华 ，史秋梅 ，高桂生 ，李春玲。，赵献军 (1西北农林科技大学，陕西杨凌，712100；2河北科技师范学院动物科学系；3广东省农业科学院兽医研究所) 摘要：从病死猪体内分离到3株链球菌，并进行了病原学鉴定。细菌在形态上呈链球菌的特征，B或0【溶血， 分离株的生化试验结果相似，且都不与A～G链球菌群特异性血清发生凝集。经PCR鉴定。结果表明，3株均 为猪链球菌2型。动物试验结果表明，3分离株对小鼠的毒力较低，但能在接种细菌12～15 d后使小鼠发病 致死。 关键词：猪链球菌2型；病原学特性；PCR 中图分类号：$858．285．1 1；R378．1 2 文献标志码：A 文章编号：1672-7983(2007)04-0024-04 各种年龄的猪均能感染猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2，SS2)，但大多在3～l2周龄的仔猪暴 发流行，尤其是断奶及混群时往往是发病高峰¨ 。根据猪链球菌荚膜抗原的不同，猪链球菌可分为35 个血清型，其中血清1和血清2为引起动物发病的主要血清型。猪链球菌2型，属兰氏分类法的R 群 J。在目前已鉴定的35种血清型(1～34型及1／2型)猪链球菌中，血清2型猪链球菌SS2流行最 广，对猪、人致病性也最强L3 J。主要引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、多浆膜炎、 支气管肺炎和猪的猝死等。并且可致人的脑膜炎、心内膜炎、败血症和永久性耳聋，严重的可导致人的 死亡。 我国发生的猪链球菌病主要由C群和D群引起。由猪链球菌2型引起的猪链球菌病，过去在欧 洲、南亚、北美一些国家流行比较多，我国自1991年在广东首次发现猪链球菌2型存在以来，最近几年 有逐渐增多的趋势 ．5 J。由于猪链球菌2型引起的链球菌病属人兽共患病，有着较高的死亡率，不仅可 造成巨大的经济损失，而且给公共卫生带来严重威胁。由于我国对猪链球菌2型的研究起步较晚，因此 对其生物学特性进行系统研究对于猪链球菌2型的诊断及免疫预防制品的研究都有重要意义。 2005年夏秋，在河北省两个不同地区的猪场出现了疑似链球菌感染病例，笔者分别从病猪上分离 到3株细菌。本次试验对分离到的细菌进行了病原学特性的鉴定，通过生化鉴定、PCR鉴定和动物试验 等手段，对该菌有了较为系统的认识。 1 材料和方法 1．1 菌种及来源 猪链球菌2型标准菌株CVCC606，由中国兽医药品监察所供应，属兰氏分群R群。SS2—1，SS2-2， SS2-3源自河北的临床分离株，由河北科技师范学院预防兽医学实验室保存。 1．2 细菌的培养特性、形态及生化特性鉴定 1．2．1 细菌的培养特I}生 分别将冻干保存和甘油保存的菌种接种于THB培养基，复苏2～3代后划线 接种于血琼脂平板(体积分数为0．06的兔血，按常规方法配制)，培养l8～24 h，挑取单个典型菌落接 种于THB液体培养基，培养l8～24 h，划线接种于犊牛血清营养琼脂、马丁肉汤培养基，观察其在液体 及固体培养基中的培养特性。 1．2．2 细菌的形态特性 分别取THB液体培养和血琼脂平板培养18 h培养物做革兰氏染色和姬姆 萨染色，观察其形态。 1．2．3 细菌的生化特性 取细菌l8～24 h液体培养物分别做糖发酵和其它生化试验。微量生化管购自 杭州微生物制品厂，部分糖发酵试验用自制糖发酵培养基进行，同时检测其在l0℃和45℃的生长情况。 收稿日期：2007-11-20；修改稿收到日期：2007—12--07 4期 吴建华等 猪链球菌分离株的病原学特性 1．3 细菌的血清群检定 用链球菌乳胶凝集标准诊断试剂盒(Streptococcus Grouping Kit，OXIOD公司产品)进行。取分离株 的18 h血平板培养物，分别与试剂盒兰氏分群A～G的乳胶诊断试剂作凝集试验(按说明书的方法进 行)，并设A～G群混合阳性抗原对照和CVCC606对照。 1．4 PCR鉴定 1．4．1 引物设计和合成 按参考文献[6，7]合成了l对特异性引物，序列如下： 检测猪链球菌2型的特异性引物 cps2J—S：5’一GTTCAGTC