LSC（激光扫描细胞仪）基本应用一：细胞凋亡检测.DOC

LSC（激光扫描细胞仪）基本应用之一：细胞凋亡检测 Annexin V/PI双染 凋亡或称为细胞程序性死亡是一种在许多细胞系统中观察到的普遍现象。细胞调亡特征包括细胞形态变小，染色质浓缩和由于核酸内切酶的作用而形成的核小体。在细胞凋亡早期，细胞膜的磷酸双分子层会发生变化。磷酸双分子层的组成物phosphotidylserine会曝露出来并在经荧光标记后可被检测。Annexin V是annexin家族成员之一，是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白。Annexin V与磷脂双分子层中的PS有高度亲合力。使用FITC标记的Annexin V和PI染料可识别出细胞膜发生改变的和丧失膜完整性的细胞群体。当使用LSC分析时，细胞可在Annexin V 和PI染色的指引下通过CompuSort被定位。 核因子N-kappa -κb（NF-κb）是一具有多功能转录与调节作用的蛋白质因子，它能与多种细胞因子和粘附因子基因启动子部位发生结合，增强某些基因的转录和表达，还可能延缓PMN的凋亡，从而广泛参与基因转录的调节，特别是一些与机体免疫应答反映密切相关的基因的转录和调控。其活化所导致的Tnf-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1等细胞因子发生改变。 正常细胞的N-kappa B分布在胞浆内，当细胞发生凋亡时其会聚集到细胞核内。通过LSC的识别细胞核及细胞浆能力可分别检测它的分布含量。 H2AX-DNA断裂点检测 DNA双链断裂是电离辐射对DNA的重要损伤类型，与细胞死亡、基因突变甚至细胞恶性转化有密切联系。DNA发生双链断裂后最早反应之一是位于断裂点附近的组蛋白H2AX的C末端丝氨酸残基发生磷酸化，形成γ-H2AX。磷酸化的γ-H2AX快速转导DNA损伤信号，导致下游分子磷酸化的激活，引发一系列的生物级联反应和和细胞学反应。γ-H2AX是迄今所研究的最重要的DNA损伤感应分子。 HL-60细胞经顺铂