一种葡聚糖芯片的再生方法、表征及其应用.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（８）：５９～６２ 一种葡聚糖芯片的再生方法、表征及其应用 １，２ ２ ２ １ １ １，２ 李雪玲 　方志俊 　黄明辉 　曹慧敏 　赵建龙 　杨梦苏 （１中国科学院上海微系统与信息技术研究所　上海　２０００５０） （２香港城市大学深圳研究院　深圳　５１８０５７） 摘要　表面等离子体共振（ｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＳＰＲ）生物传感器，作为一种适时快捷，无需 标记的生物分子相互作用研究工具，已广泛应用于生物化学分析与研究。羧甲基化葡聚糖修饰 的ＣＭ５传感芯片是 Ｂｉａｃｏｒｅ系列仪器应用最为普遍的核心部件，目前ＣＭ５芯片主要从法玛西亚 公司购买，价格昂贵，且一旦共价交联的受体分子失活，就不能重复利用。阐述了一种简便、低成 本、用于ＳＰＲ生物传感器的葡聚糖修饰金膜芯片的再生方法及其表征和应用。用此方法再生的 芯片能被循环伏安法和原子力显微镜很好地表征，并成功地用于抗前列腺特异性抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ－ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎ，ＰＳＡ）固定和ＰＳＡ检测，同时测定了ＰＳＡ与其抗体之间的动力学和亲和常数。 关键词　ＳＰＲ生物传感器　羧甲基化葡聚糖修饰表面　传感芯片再生　前列腺特异性抗原检测 　动力学和亲和力 中图分类号　Ｑ６－３ 　　ＳＰＲ生物传感器因其无需标记，适时快捷的优点， ［１］ ［２］ １　材料与方法 已广泛应用于蛋白质 蛋白质 ，蛋白质 ＤＮＡ ，多糖 ? ? ? ［３］ 蛋白质相互作用 。ＳＰＲ生物传感器中，瑞典的 １．１　仪器与试剂 Ｂｉａｃｏｒｅ系列在市场上占有很大的份额；因巯基自组装 ＴＭ 　　Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ生物传感器，ＣＭ５（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ 单分子层（ＳＡＭ）制备简单、稳定性好、膜表面缺陷少、 ｄｅｘｔｒａｎ）传感芯片，ＨＢＳＥＰ缓冲液（１０ｍｍｏｌ／ＬＨｅｐｅｓ， ? 与其共价交联的羧基化葡聚糖凝胶亲水性好、羧基与 １５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，３．４ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，０．０５％Ｐ２０，ｐＨ 生物分子氨基偶联的普遍适用性等，ＣＭ５传感芯片应 ７．４），氨基偶连试剂：氮 羟基丁二酰亚胺 （Ｎ ? ? 用最为广泛。但ＣＭ５传感芯片价格昂贵，芯片表面经 ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ，ＮＨＳ），氮 乙基 氮′（３二甲胺基 ? ? ? ? 过多次再生以后，共价偶联的生物分子容易失去生物 丙基 ）碳 二 亚 胺 盐 酸 盐 （Ｎ ｅｔｈｙｌ ＮＰ （３ ? ? ? ? 活性，使芯片废弃。ＳＰＲ传感器的这些缺点急需低成 ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ，ＥＤＣ）和盐酸乙醇胺 本的芯片出现，一种解决方式就是再生共价结合分子 （ｅｔｈｏｎａｌａｍｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；葡聚糖（ｄｅｘｔｒａｎＴ５００）购 失活的传感芯片，快速制备新的葡聚糖芯片，用于从头 自Ｐｈａ