中华大蟾蛤卵母细胞发育过程中.PDF

遗传学报，，(6):479 ActaGeneticaSinica 中华大蟾蛤卵母细胞发育过程中 乳酸脱氢酶同工酶表现 蒙义文 莫卫平 徐维政 陈素文 （中国科学院成都生物研究所二室） 采用聚丙烯 C胺凝胶盘状电泳研究了中华人蟾蛛卵母细胞不同发育时期的乳酸脱氢酶 (LDH）同工酶。发现在蟾赊卵母细胞的不同时期存在有四种类型的酶谱。分析了这四种类型 酶谱出现频率与卵母细胞发育时期的关系，发现在卵母细胞形态变化最显著的时期，卵的LDH 特征酶谱类型也有显著的变化。 细胞分化是特定基因在特定时间的优势激活与调节的结果，〔，‘，细胞分化问题就是胚 胎发育过程中特异蛋白质的合成问题31〔。作为特异蛋白— 某种同工酶的分析可能将基 因活动的状况以直观形式展现出来。近十多年来，国外有人用同工酶研究基因表达，如哺 乳类的小鼠[121和家兔15〔]，都作过 LDH 同工酶分析。近几年 Whirr等人在硬骨鱼中用 LDII同工酶研究胚胎发育中的基因表达[5［,14,16]。关于两栖类胚胎发育中LDH表现也有 一些报道4,〔1l)。已有的实验表明，胚胎发育中同一器官的 LDH是有变化的，如小鼠肾在 出生前5天，A基因占优势，出生后逐渐变为B基因占优势，与成体肾一样[12［)。此外，家兔 未受精卵和发育到2天 （16细胞）卵裂的早期胚胎，主要是A型亚基组成的靠阴极的谱 带。随后，卵裂进行到4和6天囊胚期胚胎时，LDH 活性增加，同时同工酶谱带变成B 亚基占优势的阳极酶谱类型。同样鳍鱼和爪蟾早期胚胎发育的LDH都有不同程度的变 化。上述实验大都是作的受精卵直到胚胎发生、器官分化等。即使作过未受精卵的LDH 酶分析的[15［1，也局限于成熟卵。 对于卵母细胞不同发育时期的同1酶分析至今未有报 道。 两栖类卵子发生的时间可长达二年左右17〔1，这期间卵母细胞同工酶表现是否有变化 呢？大家知道两栖类卵母细胞灯刷染色体时期合成了大量的 RNA，使一个成熟的爪蟾 卵含有高达4微克的 RNA[1o。 这说明在卵母细胞中基因进行了大规模的转录。 据认 为51「，卵母细胞中转录的mRNA 还（有核糖核蛋白体 rRNA）有一部分将贮存到受精 卵后的个体发育时期。因此，探讨卵母细胞中的基因活动状况，将提供早期胚胎发生中基 因表达调控的线索。 材 料 与 方 法 大蟾赊中华亚种 佃ufobufogargarizans）来自成都郊外。卵母细胞的收集是将蟾蛛 本文于 1981年2月25日收到。1982年I月24日收到修改稿。 48() 遗 传 学 file 。卷 活体解剖后，取出卵巢置于两栖类生理盐水中，在体视显微镜下剥离。游高出的卵仿照 Grant法L7，从形态上分成五类：A期卵：细胞直径大约在0.2mm 以下，没有卵黄和色索， 因而呈白色或浅黄色的小卵，简称为“白色小卵，；’B期卵：细胞直径0.2mm-0.5mm，含 少量卵黄，无色素，卵呈黄色，简称为 黄“色小卵，；’C期卵：直径0.5nnm-0.75mm，有卵 黄，简称黄色大卵；D期卵：直径0.75mm--Imm，充满卵黄并带色素颗粒因而呈灰色，简 称 “灰色大卵”；L期卵：直径 l.Omm1.8mm，成熟的卵母细胞，有色素，卵呈黑色，简称 为 “黑色大卵”。上述分法与 Grant法仅在卵的直径上略有差别，因为 Grant分的是爪 蟾，我们所用中华大蟾蛛的卵比爪蟾卵略大，故直径范围相应放大。 成体各器官组织与卵母细胞的样品制备按薛国雄U7介绍的方法进行。所不同的是， 我们将不同个体取得的卵或器官分别进行制样，即每次杀一只动物，取各器官及按外形分 类的卵，分别编号点样。从1978年2月至 1979年 10月期间各种器官的分析达20次以 上，其中有约五分之一的雄体；而分析卵的动物个体在200只以上。采用盘状聚丙烯酞胺 凝胶电泳，分离胶浓度5多、pH8.9的碱性系统。凝胶制备按 Dabriel介绍C97。电泳槽为 一般的圆筒状有机玻璃槽。指示剂染料为0.01界澳酚蓝水溶液1m1加入上槽 负（极）缓 冲液中。电泳进行时每管电流2mA左右，电压维持在100200V之间，待澳酚蓝泳动到 50m