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上海交通大学医学院检验医学系 本科医学实验技术考试试题 姓 名__________ 学 号______ 得 分__________ 一．选择题（20分，每题2分） 1.PCR反应中需要 A．DNA聚合酶 B.RNA聚合酶 C.RNA酶 D.DNA酶 2.荧光定量PCR检测样本的核酸量为 A．初始核酸量 B．终末核酸量 C．平台期核酸量 D．Ct值处核酸量 3.IEF电泳时 A．上极槽置酸液，下极槽置碱液 B．酸液置负极槽，碱液置正极槽 C．上极槽置碱液，下极槽置酸液 D．碱液置负极槽，酸液置正极槽 4.在凝胶层析中，下列哪种说法是错误的？ A. Ve = Vo 故Kd = 0 B. Ve = Vi故Kd = 1 C. Ve = Vo + Vi故Kd = 1 D. 0(Kd (1故Ve = Vo + Kd Vi 5.在亲和层析中，Kd越小则 A. KL越大 B. KL 越小 C. KL不变 D. KL不定 6.葡聚糖Sephadex G75每克凝胶吸水量为 A.0.75ml B.7.5ml C.37.5ml D.150ml 7.为在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中掩盖了哪个效应？ A.浓缩效应 B.分子筛效应 C.电荷效应 D.粘质效应 8.沉降系数的单位是S，那S的单位是 A．10-12s B．10-13s C．10-14s D．10-15s 9.以下哪种不是免疫细胞表面的功能分子A.TCR B.BCR C.FCR D.GVHR 10.列哪种不是FCM的数据显示方式单参数直方图二维点图维等高图列表模式yeast two-hybrid system 四、问答题（65分） 1.荧光对流式细胞仪检测结果的影响及采取的措施。 2.结合所做实验，亲和层析法分离凝集素的载体和配基分别是什么？简述实验基本原理及过程。 3.请简述激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及应用范围。 4. 简述淋巴细胞毒试验。根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为主要类型 答案： 一、选择题 1、A 2、A 3、D 4、B 5、A 6、B 7、C 8、B 9、D 10、C 二、名词解释 1、指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。M=Q/6πrη 2、是指分离后的样品中该亚群细胞所占的百分比。 3、C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 4、通常被用来叙述一种化合物在互不相溶的两个相中分配的状况。对于层析来说，分配系数定为分配平衡时该化合物在移动相中的浓度除以固定相中的浓度。 5、酵母双杂交系统是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统，也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法荧光信号主要包括两部分：自发荧光，即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子（例核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。 　　减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：尽量选用较亮的荧光染料；选用适宜的激光和滤片光学系统；采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。 基本原理激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描，标本上的被照射点，在探测针孔处成像，由探测针孔后的光点倍增管或冷电耦器件逐点或逐线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面，克服了普通显微镜图像模糊的缺点。 应用范围：细胞形态学分析；荧光原位杂交研究；基因定位研究及三维重建分析。1)细胞生物学：细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化生物化学：酶、核酸、FISH）、受体分析3)药理学：药物对细胞的作用及其动力学4)生理学：膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态5)神经生物学：神经细胞结构、神经递质的成分