中文摘要鸽肝苹果酸酶为氧化脱羧酶，同时具有催化氧化还原与脱羧.PDF

中文摘要 鴿肝蘋果酸酶 為氧化脫羧酶 ，同時具有催化氧化還原與脫羧反應的能力，是一酸 鹼催化機制，過去我們把E234、D235、D257、D258 這些位置的胺基酸以alanine 作取 代時，發現這些突變型蘋果酸酶 的活性分別有兩倍到萬倍不等程度的下降，因而認為在 這些胺基酸中，它們所移去的羧基對整個蘋果酸酶 的催化作用有影響，今天我們試圖以 化學回復(chemical rescue)的方式，即是以外來化合物提供羧基的方法，試圖回復E234、 D235、D257、D258 所下降的活性，並且以化學回復(chemical rescue)這樣的實驗來驗證 E234、D235、D257、D258 這幾個胺基酸殘基，在整個蘋果酸酶 催化過程中有無扮演催 化鹼的角色。 實驗中，我們發現突變型 E234A、D235A、D257A 鴿肝蘋果酸酶 的活性並無回 復的情形，是因為它們的羧基對整個蘋果酸酶 的催化作用，可能並非是擔任一個催化鹼 的角色。突變型鴿肝蘋果酸酶 D258A 比起野生型鴿肝蘋果酸酶 kcat 下降3970 倍，在50mM azide 作用下其kcat 增加976 倍(約野生型鴿肝蘋果酸酶 kcat 的24 %)，同樣地，也發現在 50mM azide 作用下，對於D258A 在氧化還原半反應中 kcatPyr 則增加了200 倍(與野生型 鴿肝蘋果酸酶 kcatPyr 相同) ，而在脫羧半反應下的活性也有3-8 倍的增加，因而認為azide 的確是取代了D258 的羧基來當一催化鹼的角色，執行proton accepter 作用 。 11