人用重组DNA制品质量控制技术指导原则-湖南省药品审评认证与.PDF

人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则 一、引言 由于分子遗传学、核酸化学及重组 DNA （rDNA）技术的迅速发展，现已能够 确定和获得许多天然活性蛋白的编码基因，将其插入表达载体或引入某种宿主细 胞后，能有效地表达该基因产物，再经分离、纯化和检定，可得到用于预防和治 疗某些人类疾病的制品，诸如现有的乙型肝炎疫苗、胰岛素、生长激素、干扰素 等。 用不同于常规方法的 rDNA 技术生产的制品，是近年来出现的新产品，评价 其安全性和有效性亦不同于常规方法。这一领域中的知识和技术还在不断发展， 为了有利于这类制品在我国的研究和发展，并为这类制品的审评提供依据，有必 要制定一个原则性指导文件，以保证在人群中试验或应用时安全有效。 本 “人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则” （以下简称 《指导原则》） 不可能面面俱到，可能有许多专门技术问题会出现，对于这类问题或某一特定制 品，则应视具体问题具体研究决定。本 《指导原则》亦将随科学技术发展和经验 积累而逐步完善。 二、总则 （一）本 《指导原则》适用于 rDNA 技术生产并在人体内应用的蛋白质、肽 类制品。 （二）凡属与一般生物制品有关的质量控制，均按现行版 《中国药典》有关 规定执行。有关生产设施的要求应参照国家药品监督管理局 《药品生产质量管理 规范》执行。 三、质量控制要求 （一）原材料的控制 1．表达载体和宿主细胞 应提供有关表达载体详细资料，包括基因的来源、克隆和鉴定，表达载体的 构建、结构和遗传特性。应说明载体组成各部分的来源和功能，如复制子和启动 子来源，或抗生素抗性标志物。提供至少包括构建中所用位点的酶切图谱。应提 供宿主细胞的资料，包括细胞株 （系）名称、来源、传代历史、检定结果及基本 1 生物学特性等。 应详细说明载体引入宿主细胞的方法及载体在宿主细胞内的状态（是否整合 到染色体内）及拷贝数。应提供宿主和载体结合后的遗传稳定性资料。 2．克隆基因的序列 应提供插入基因和表达载体两侧端控制区的核苷酸序列。所有与表达有关的 序列均应详细叙述。 3．表达 应详细叙述在生产过程中，启动和控制克隆基因在宿主细胞中的表达所采用 的方法及表达水平。 4．原辅料 原辅料应按照国家药品监督管理局有关规定执行。动物源性原料的使用应提 供来源及质控检测资料；发酵用培养基不能添加 β内酰胺类抗生素。 （二）生产的控制 1．主细胞库 （MASTERCELLBANK） rDNA 制品的生产应采用种子批 （SEEDLOT）系统。从已建立的主细胞库中， 再进一步建立生产细胞库 （WCB）。 含表达载体的宿主细胞应经过克隆而建立主细胞库。在此过程中，在同一实 验室工作区内，不得同时操作两种不同细胞 （菌种）；一个工作人员亦不得同时 操作两种不同细胞或菌种。 应详细记述种子材料的来源、方式、保存及预计使用寿命。应提供在保存和 复苏条件下宿主载体表达系统的稳定性证据。采用新的种子批时，应重新作全面 检定。 真核细胞用于生产时，细胞的鉴别标志，如特异性同功酶或免疫学或遗传学特征， 对鉴别所建立的种子是有用的。有关所用传代细胞的致癌性应有详细报告。如采 用微生物培养物为种子，则应叙述其特异表型特征。 一般情况下，在原始种子阶段应确证克隆基因的 DNA 序列。但在某些情况下， 例如传代细胞基因组中插入多拷贝基因。在此阶段不适合对克隆基因作 DNA 序列 分析。在此情况下，可采用总细胞 DNA 的杂交印染分析，或作 mRNA 的序列分析。 对最终产品的特征鉴定应特别注意。 种子批不应含有外源致癌因子，不应含有感染性外源因子，如细菌、支原体、 2 真菌及病毒。 有些细胞株含有某些内源病毒，例如逆转录病毒，且不易除去。但当已确知 在原始细胞库或载体部分中污染此类特定内源因子时，则应能证明在生产纯化过 程可使之灭活或清除。 2．有限代次生产 用于培养和诱导基因产物的材料和方法应有详细资料。对培养过程及收获 时，应有敏感的检测措施控