5种哺乳动物组织DNA提取比较研究.pdfVIP

第23卷第4期 德 州 学 院 学报 VO1．23，NO．4 2007年 8月 Journal of Dezhou University Aug．，2007 5种哺乳动物组织DNA提取比较研究 刘 娟 (德州学院生物系，山东德州 253023) 摘 要：以大仓鼠、家兔、刺猬等动物新鲜冷冻样品为实验材料，比较了从不同动物的5种样品组织中提取的 全基因组DNA．结果表明：从以上三种动物不同样品组织中均能提取到比较纯净完整的基因组DNA，而且从动物 肝脏中提取的全基因组DNA纯度和浓度都优于其它材料，能够更好的适用于继后的分子生物学试验研究． 关键词：动物；基因组DNA；提取 中图分类号：Q78l 文献标识码：A 文章编号：1004—9444(2007)04—0052—02 真核生物基因组 DNA广泛应用在动植物的遗 1．2 基因组总DNA的提取 传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系 参考基因组总 DNA的标准提取法并加以改 统演化等方面的研究中．无论是基因工程，还是蛋白 进．①用灭菌牙签将每种组织各取出2 g分别放置 质工程，核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要 于1．5 mL离心管中．②在每只离心管中先加入300 对象，所以DNA的分离与提取是分子生物学研究 L冰预冷的DNA抽提缓冲液(10 mmol／L Tris· 中重要的基本技术．哺乳动物 DNA的分离通常是 C1，0．1 mol／L EDTA，20 p．g／mL胰 RNA酶，0．5％ 在存在EDTA及SDS去污剂条件下用蛋白酶K消 SDS，pH 8．0)，机械碎裂组织块直至粉末状，最后各 化细胞，随后用酚抽提蛋白质而实现的．伴随着 补足抽提缓冲液600 L，颠倒混匀后置37℃水浴1 PCR技术的产生和测序技术的不断完善，获取标本 h．③取出离心管，每管各加蛋白酶K至终浓度100 DNA一维信息的技术也得到进一步的发展[1 ]．目 ~tg／mL，55℃水浴消化约3 h，其间不时的颠倒混匀 前对于动物全基因组DNA的提取已有不少研究和 几次．④在每只离心管中加入等体积饱和酚抽提 1 报道l5 ，但是选取何种组织材料能够提取高质量 次，再用酚 ：氯仿(1：1)抽提 1次，最后再用氯仿抽 的基因组DNA，还是一个值得探讨的问题．文中比 提1次．⑤分别转上清于新离心管中，加2倍体积的 较研究了从冷冻的家兔(Oryctolagus curiculus)肝 无水乙醇和0．2倍体积的醋酸铵(10 mol／L)，沉淀 脏和肌肉组织、大仓鼠(Cricetulus trition)肝脏和肌 DNA，反复摇匀，置于一2O℃ 20 min以上．以13000 肉组织、刺猬(Erinaceus europaeus)肌肉组织中提 r／min离心20 min，弃去上清，用 7O 乙醇漂洗沉 取的DNA，以利于选取DNA获取率高的试验材 淀2次，室温自然干燥．⑥DNA用适量无菌水或TE 料，为后续分子生物学试验研究的开展提供了可靠 缓冲液(10 mmol／L Tris·C1，1 mmol／L EDTA， 的依据． pH 8．0灭菌后用)溶解． 1．3 样品基因组DNA质量检测与鉴定 1 材料和方法 用0．8 琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA质 量，紫外