FPLC在纯化马铃薯酪氨酸酶中的应用.pdfVIP

第 1 9卷 第4期 江 苏 工 业 学 院 学 报 VoI_1 9 No．4 2007年 12月 J0URNAL 0F JIANGSU P0LYTECHNIC UNIVERSITY Dec．2007 文章编号：1673—9620(2007)04—0037—04 FPLC在纯化马铃薯酪氨酸酶中的应用 吕新宇 ，刘英杰。，刘英莉。，李 莉。，江 敏。 (1．江苏工业学院精细化工研究所，江苏 常州 213164；2．常州格雷特新材料科技有限公司，江苏 溧阳 213372；3．武进 第二人民医院，江苏 武进 213011) 摘要：对马铃薯酪氨酸酶的分离纯化进行了初探。其粗酶最佳硫酸铵盐析浓度65 ，最佳温度3O℃，最佳pH 7．5。分别预装 Sephodex G75分子筛凝胶柱和HiTrip Q FF阴离子交换层析柱在FPLC自动分离得到纯化的酪氨酸酶，最高纯化倍数达6O，并 以L—DOPA作底物，测得比酶活为242．84 U／mg蛋白。对酶活最大的组分进行了SDS—PAGE表征，电泳呈现一条带，相对 分子质量为5，6×10 。米氏常数K 为2．0 mmol／L。 关键词：马铃薯酪氩酸酶：快速蛋白液相色谱；电泳 中图分类号：O 629．8 文献标识码：A Research on Separation and Purification of Potato Tyrosinase by FPLC Method LU Xin—yu ，LIU Ying--jie ，LIU Ying—li。，LI Li。，JIANG Min。 (1．Institute of Fine Chemicals，Jiangsu Polytechnic University，Changzhou 2 l 3 l 64，China；2．Chang— zhou Great New Material Technology CO．，LTD，Liyang 213372：3． The Second People S Hospital of Wu．in，Wu．in 2l3Ol1) Abstract：Tyrosinase was separated and purified from potatoes through salting precipitation，dialysis，DE— AE—Sepharose FF column chromatography and HiTrip Q FF column chromatography．The optimal sal— ting precipitation concentration of tyrosinase WaS about 65 ．The optimal temperature of WaS about 30。C．The optimal pH WaS about 7．5．The specific activity WaS 242．84 U／mg．The molecular weight WaS 5．6×10 with SDS—PAGE．The K value of tyrosinase for L—DOPA WaS 2．0 mmol／L． Key words：potato Tyrosinase；FPLC；e1ectrophoresis 酪氨酸酶是一种含铜金属酶，普遍存在于哺 养物质的丧失。因此，酪氨酸酶在医药、环境、食 乳动物、植物和微生物中，主要参与生物体内黑色 品、精细化工等领域具有广泛的用途口 。 素和其他多酚类物质的形成。该酶能催化单酚类物 “FPLC”全称为快速蛋白液相色谱 (Fast pro— 质生成O一二酚 (单酚酶活性)，并进一步转化成 tein liquid chromatography)，其原理是利用不同的 O一醌 (二酚酶活性)，生成的这些醌类物质易于 层析柱 (疏水、离子交换、凝胶、亲和、反相等)， 多聚化，并与细胞内蛋白作用，生成黑色或棕色的