一株产聚γ-谷氨酸菌株的筛选.pdfVIP

… … 14 7期)_… ，…… ～ …一一 一……一～……………～……… …一一 … 查蔓鲞 一 株产聚Y一谷氨酸菌株的筛选 邵丽 刘建军 赵祥颖 (1．山东轻工业学院食品与生物工程学院 济南 250353) (2．山东省食品发酵工程重点实验室 济南 250013) 摘 要 从豆瓣酱等样品中分离获得一株细菌菌株L536，其代谢产物通过紫外扫描分析、纸层析及氨基酸组成分析，确 定其为聚谷氨酸，本文报道了聚Y一谷氨酸产生菌株的筛选过程。 关键词 聚Y一谷氨酸 菌种筛选 前 言 1 材料和方法 聚Y一谷氨酸(Y—Polyglutamic acid；Y—rGA)是 1．1材料 某些杆菌产生的一种胞外氨基酸聚合物，是一种水溶 1．1．1分离材料 性可生物降解的新型生物高分予材料，作为生物絮 纳豆、豆瓣酱、豆豉、酱豆、腐乳等。 凝剂、增稠剂、加湿剂、药物载体，药物缓释剂、生 1．1．2培养基 物可降解纤维、高吸水性树脂、霞金属吸收剂以及 1．1．2，1分离培养基 ( L)：柠檬酸三钠l6，谷氨酸 食品添加剂等在食品工业、药物工业、化妆品工业 钠20，氯化铵7，酵母膏5，K2HI?040_5，Mgs · 0．5， 及污水治理等领域具有广泛的用途，聚Y一谷氨酸 MnS04．H20 0．1，CaC12‘2H20 0．15，FeC136H20 0．04， 由L一谷氨酸、D一谷氯酸通过Y一酰胺键聚合而成， 琼脂18，pH值7．0。 可生物降解，可食用且对人体和环境无毒害，是一 1．1．2．2斜面培养基 (g／L)：蛋白胨l0，酵母膏5， 种重要的多功能新型生物制品Il1。1937年Ivanovic NaC110，琼脂20，pH值7．0—7．2。 等人从炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)的荚膜中发现了 1．1．2．3富集培养基 (g／L)：柠檬酸三钠16，谷 Y—PGA。1942年Bovarnick等人研究发现有些芽孢 氨酸钠 氯化铵7，酵母膏5，K2I-~40．5，M~47H200． 杆菌属细菌能在发酵培养基中蓄积Y-PGA，从此揭开 5，MnS04’H200．1，CaC12’2H200．15，FeC13．6H200．04， 了微生物法生产Y—PGA的研究历史。目前，报道的 pH值7．0。 产生Y—PGA的菌株主要集中在芽孢杆菌，如 (纳 1．1．2．4摇瓶发酵培养基( L)：柠檬酸三钠l6，谷 豆)枯草芽孢杆菌(B．sublitis)【2 ·引、地衣芽孢杆菌 氨酸钠20，氯化铵7，豆粉30，K，HP0 0．5，MgS04· (B．1icheniformis)【5】和炭疽芽孢杆菌等以及短小芽 7H，0 0．5，MnS04．H，0 0．1，CaC1 2~2H，0 0．15，FeC1 。 孢杆菌 (B．P U m i l U S)、耐热芽孢杆菌(B． 6H，00．04，pH值6．5。 thermotolerant)f ， 等，由于菌株产率较低，营养条 1．2方法 件要求苛刻，难以大规模生产，筛选优良的Y—PGA 1．2．1菌种筛选 生产菌种尤为重要。 样品悬浮于无菌水中静置20 min后，沸水浴煮 笔者等人从豆瓣酱等样品中自然分离获得一株 沸5min，富集培养24 h．梯度稀释至适当浓度，涂 细菌菌株L536，其代谢产物通过紫外扫描分析、纸 布分离平板，37℃培养24h，挑取粘稠且有明显拉 层析及氨基酸组成分析，确定其为聚谷氨酸，本文 丝的单菌落。将分离到得的菌株接种于摇瓶发酵培 报道了聚Y一谷氨酸产生菌株的筛选过程和结果。 养基中，37~C、200r／min振荡培养2d左右，测定发