复旦大学分析化学AII第十章液相色谱剖析.ppt

第21章 液相色谱分析法 一. HPLC与GC的区别 速率方程H=A+B/v+Cv A（涡流扩散项）∝dp B（分子扩散项）忽略不计 C（传质阻力项）∝dp2 v∝1/dp 二.高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三. 液相色谱类型 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂（固体固定相） 弱极性物质——选择强吸附剂（固体固定相） 3. 流动相的选择： “相似相溶”原则 基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 2. 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 液固色谱的固定相与气固色谱的相类似，但粒子更小。 液液色谱的固定相：化学键合的固定相——载体+固定液 (1).固定相的载体 a、硅胶 ⑴ 无定形全多孔硅胶 YWG ⑵ 球形全多孔硅胶 YQG ⑶ 堆积硅珠 YQG b、高分子多孔微球 YSG (2). 固定相的化学键合 (3). 化学键合固定相的特点 (4).正相键合相色谱法的分离条件 固定相：极性键合相，如氨基、氰基 适应对象：极性化合物，如 氨基、氰基、糖类多官能团化合物 流动相： 烷烃加适量极性调节剂（二氯甲烷＋甲醇） 出峰次序：极性小先出峰 (5). 反相键合相色谱法的分离条件 固定相：非极性键合相 如ODS 适应对象：非极性或极性分子型的化合物，如 短链烷和苯基化合物 流动相：极性最强的水作基础溶剂，加入甲醇、乙腈 、四氢呋喃等极性调节剂 出峰次序：极性大先出峰 （6）、正反相键合相色谱法的比较 (b).流动相分类 (c). 流动相选择 四、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 1、主要部件 Main assembly of HPLC (2). 液相色谱检测器 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 b. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 示差折光检测器 c. 荧光检测器（fluorescence detector） 气相色谱分离条件：1.柱温；2.气体压力、流速 (4). 梯度淋洗装置 (5). 进样装置 (6). 高效分离柱 五. 分离类型选择 Choice of separation types 高灵敏度(10-12g/ml)、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； (3). 高压输液泵 主要部件之一，压力：20-80大气压。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 程 序 升 温 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 * * 流动相分别为液体和气体：扩散系数 Dm液/Dm气=10-5 填充柱气相色谱柱，填料尺为80-100目(2毫米); 高效液相色谱的固定相粒度在2－10微米,因此需要很高的反压。 高效液相色谱（HPLC）又称为： 高速液相 HSLC 高压液相 HPLC 高分辨液相 HRLC 2mm 2－10um 载体粒子 ＞1 m 10