绪论-植物组织培养介绍.ppt

致癌农杆菌介导的Ti质粒载体转化法 2、重组DNA的直接转化法 微粒散射技术 (Particle bombardment) （二）基因工程的基本步骤 1、目的基因的克隆与鉴定； 2、植物表达载体的构建； 3、植物的遗传转化； 4、转化细胞的筛选； 5、转基因植株的鉴定。 基因 基因克隆 基因转化 DNA重组技术 植物遗传转化技术 植物组织培养技术 抗病细胞突变体基本原理 抗病细胞突变体筛选程序 抗病细胞突变体筛选实例 六、植物抗病细胞突变体筛选 基本原理 利用植物组织培养过程中出现的变异，或由物理、化学因素诱发变异，给予一定的选择压力，筛选出符合育种目标的无性系。 基本程序 选择压力 选择突变体 分离突变体 鉴定突变体 愈伤组织 细胞 原生质体 保持和利用突变体 愈伤组织：最简单的细胞材料，缺点多，普遍采用。 细胞培养物： 由少数细胞集合而成，可弥补愈伤组织的不足。 原生质体：最理想的细胞材料，但分离和培养技术不完善，不能普遍采用。 材料选择 负选择法：选择一种培养基，使得突变细胞不能生长，野生型细胞生长。然后加负选择剂，可杀死野生型分裂细胞，保留生长的突变细胞。 正选择法： 将细胞置于有害或有毒的培养基中，能生长的为突变细胞。 突变体的分离 突变体的4个特征： 突变体以低频率发生 离开选择压，突变体稳定 植株再生后，突变细胞系稳定，从再生植株发生的愈伤组织，表达其被选择出的表现型 选择出的表现型能通过有性繁殖传递，保证它是突变的。 植物抗病细胞突变体筛选 突变体的鉴定 储藏再生植株种子 突变细胞系再生成植株，取其茎尖，无性系繁殖 不能再生植株细胞系，在液氮中低温储藏 植物抗病细胞突变体筛选 突变体的保存 七、培育脱毒作物 (1)材料:无病毒的茎尖 (2)脱毒苗:切取茎尖进行组织培养获得 八、植物组织培养大量生产紫草素 现在已有胡萝卜、芹菜、柑橘、咖啡、棉花、玉米、水稻、橡胶等几十种植物的人工种子试种成功，但由于成本较高，中国尚未应用于生产。 紫草 紫草素 愈伤组织 小结： (1)植物组织培养是指分离单个、多个细胞、植物体的一部分，在人工配制的培养基上进行培养，使之长成一株完整植物体的过程。 (2)类型：按照外植体的不同，分为器官培养、细胞培养、原生质体培养3种类型。 (3)组织培养特点：培养条件可以人为控制，生长周期短，繁殖率高，管理方便，利于工厂化生产的突出特点，因而发展迅速。 (4)组织培养技术在农业生产上的应用主要有以下几个方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工厂化育苗。 * * * * * * * * * * * * 脱毒快速繁殖技术 现已发现的植物病毒有500多种，一些植物病毒相当严重，给生产造成极大损失，如葡萄扇叶病毒。使葡萄减产10%~50%，花卉病毒使各种花卉严重退化，致使花少而小，甚至造成畸变和变色。利用组织培养脱毒后所得到的无毒植株，形状明显优于原来染病植株。 大规模生产 农作物：甘蔗、甘薯、马铃薯 果树：葡萄、柑橘、苹果、桃 花卉：菊花、香石竹、蝴蝶兰 苗木：桂花、银杏 药材：太白七药、红豆杉、紫草、人参 甘蔗茎尖快速繁殖 甘蔗脱毒苗与常规苗相比，果蔗增产33.6%～69.4%，糖料蔗蔗茎增产15.1%～52.1%、蔗糖分提高0.12%～1.71%(绝对值)。 柑橘的快速繁殖（非试管苗） 桔子传统都是以嫁接的方式进行繁殖,其成苗需要1-2年的时间才能成苗,繁殖速度非常的慢,而采用植物非试管快繁技术 ，采其一个枝段,在智能化控制的快繁苗床给其创造最佳的生根环境,就能快速的生根成苗 。 选择幼小的桔树,取粗壮的枝条作为离体材料,一般取材长度为5厘米,下切口靠芽带一定斜度斜剪,再用快繁宝处理,处理后繁殖于智能化控制的快繁苗床, 能快速的生根 。 菊花快速繁殖 菊花组织培养，茎尖是主要培养部位，其它还可采用茎段、花托、花瓣、叶片等。用于快速繁殖、加