流式细胞仪结构与原理流式细胞仪是进行流式细胞分析的-中国试剂网.PDF

中国试剂网 3.8.8.113 流式细胞仪结构与原理 流式细胞仪是进行流式细胞分析的仪器，集电子、计算机、激光、流体理论 于一体，被誉为试验室的“CT” 。 流式细胞术 （Flow CytoMeter, FCM ）是一种在功能水平上对单细胞或其他 生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时 从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准 确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 工作原理 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不 含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一 定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细 胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样 品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种 信号同时被前向光电二极管和 90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小 角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与 激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长 的荧光信号。 这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓 度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过 A ／D 转换器，将连续的电 信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算 机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的 形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方 图的形式表达，其X 轴为测量强度，Y 轴为细胞数 目。一般来说，流式细胞仪 坐标轴的分辨率有 512 或 1024 通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于 双参数或多参数数据， 既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的 三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。 中国试剂网 3.8.8.113 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有 一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞 就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千 伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电 的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 应用范围 用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已 开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和爱滋病感染者 T4、T8 细胞的记数。 70 年代以来，随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。 流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿 瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、 生物化学等临床医学和基础医学研究领域。 技术特点 流式细胞仪作为一种先进的细胞定量分析检测仪器，设计上采用了许多独特 的技术，其中涉及到液流系统、光路系统、信号测量和细胞分选等4 个方面。 展望 流式细胞仪从细胞技术开始发展到今天，60 至 70 年代是其飞速发展时期， 激光技术、喷射技术以及计算机的应用使流式细胞仪在原理和结构上形成了固定 的模式。 80 年代则是流式细胞仪的商品化时期，这期间不断有新型号的仪器推出， 在多参数检测技术上不断提高。 进入 9