实验二新城疫病毒的鸡胚培养201506012.ppt

* 实验二　病毒的鸡胚培养 * 目的要求 基本原理 器材准备 实验内容和方法 思考题　 * 一、目的要求 掌握病毒的鸡胚接种。 掌握鸡胚增殖病毒后的收获方法。 掌握病毒血凝价的测定及判定。 * 二、基本原理 鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人类和动物病毒的生长增殖； 对接种的病毒不产生抗体。 * 三、器材准备 鸡胚：9～11日龄非免疫ND疫苗种鸡所产的白壳鸡胚。 接种材料：新城疫LaSota株。 器械：孵卵器、照蛋器、蛋架、打孔器、铅笔、 1ml注射器、3%碘酊、75%酒精棉球、蜡烛、剪刀、镊子、灭菌的离心管、平皿等。 * 四、实验内容和方法 （一）接种前的准备 （二）接种 （三）收获 * （一）接种前的准备 1、鸡胚的准备 选择9～11日龄的鸡胚，在照蛋时以铅笔勾划出气室边界、胚胎及主要血管位置，在胚胎对侧距气室边界上或下约5mm处避开血管作标记，作为接种部位。 用2 ～ 5%碘酊对接种部位进行消毒，用75%酒精再擦一遍。 * 2、病毒接种材料的准备 要分离培养的病毒材料应是无菌的，因此为达到材料无菌的目的，可在每ml接种物质中加青霉素和链霉素各100~500IU，置室温中1小时或冰箱中12~24小时处理。或经滤器除菌。 * （二） 接种 1、钻孔 将选好的鸡胚气室向上置于蛋架上，在所标记部位用经75%酒精棉球消毒的打孔器钻一个小孔。 注意：恰好使蛋壳打通而又不伤及壳膜。 * 2、绒毛尿囊腔内注射 ①用1ml注射器抽取接种物，45°角斜刺入小孔1.5cm达尿囊腔内，注入接种物 0.1 ~ 0.2mL。 ②在距气室底边0.5cm处打一小孔，由此孔进针1~1.5cm注射接种物0.1~ 0.2mL。 　 * air pocket shell outer shell membrane allantois amnion yolk sac albumen chorion embryo 禽胚结构 * 尿囊腔接种法 * 3、封孔、孵育 注射接种物后用融化的石蜡或消毒胶布封闭注射小孔。 将鸡胚气室朝上置于37℃温箱中孵育。 每天翻蛋两次，照视一次，24小时内死亡的舍去。 * （三）收获 接种后在温箱培养24 ~ 48小时即可收获。 收获前应将鸡胚置4度冰箱冷藏6小时或过夜，以免收获时血管破裂。 收获前用碘酒、酒精消毒蛋壳，用镊子去除蛋壳和壳膜，撕破绒毛尿囊膜而不破羊膜。 用灭菌镊子轻轻按住胚胎，以灭菌吸管或注射器吸取尿囊液，装入灭菌容器内。多时可收集5 ~ 8ml/枚鸡胚。 如有血细胞应以2000r/min离心15min, 取上清液做血凝试验。 * 五、思考题 1、用鸡胚培养病毒,在选用鸡胚时应注意什么问题? 2、以鸡胚尿囊腔接种培养病毒的操作过程中应注意什么问题？ 3、鸡胚接种含有新城疫病毒的病料后，其死亡胚体的有哪些病变特征，若接种48h后胚体未死，原因是什么？ 4、为什么接种新城疫病毒后24小时内死亡的鸡胚要丢弃，而不用于收获病毒？ 5、孵化鸡胚的过程中，为什么要翻蛋？ 6、用鸡胚增殖病毒时有哪些优缺点？