微生物限度检查.ppt

微生物限度检查法张翠所 第一节 微生物限度检查概述及限度标准 一、 微生物限度检查的概念和意义 1、微生物限度检查的概念 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。 检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 2、微生物限度检查的意义 （1） 药品染菌对使用者的潜在危害 药品中染菌数量愈高，其中所含致病菌的几率愈高，这是造成药源性感染疾病的直接原因。 药品染菌还可使其产生霉变、酸败等理化性质改变造成药品失效、变质，甚至产生毒素，危害使用者的健康。 为保证药品质量，必须对微生物污染进行必要的控制和检验。 （2）药品染菌反映药品生产工艺的科学性、合理性及质量管理水平。 微生物限度检查的各项数据，是对药品生产工艺、生产环境、质量管理及人员素质的综合评价依据之一。 只有优良的GMP企业，才能提供优质的医药产品，凡工艺条件、生产管理水平、生产人员素质差，不注意文明生产的单位和企业，其生产的药品，染菌必然严重，不合格率高。 二、药品微生物限度检查的特殊性和基本条件 1、药品微生物限度检查的特殊性 （1） 活体细胞 （2）分布不匀 （3）多数处于受损状态 （4）生境复杂 （1） 活体细胞 药品微生物限度检查以活体菌细胞为对象，污染菌在药品中处于不稳定状态，可随存放时间延长而死亡，也可在适宜条件下大量繁殖。药品还可因为本身性质，存放温、湿度，暴露空气等状态不一，污染菌发生变化导致检出结果的差异. 由于检验对象的这种活体特征，保持供检样品污染菌尚存活而又不大量增殖尤为重要。 （2）分布不匀 药品中微生物特别是在生产企业后期污染者通常是局部的，非均匀的，同一批产品中不同部位、人员操作、包装点的不同瓶（盒、袋）常出现检测结果差异。 为提高检出的阳性率，限度检验的供检样品规定了检验数量。 （3）多数处于受损状态 药品污染菌自生长过程中受到原料处理、加工、加热以及药物本身的影响，有一定的损伤，受损的细胞在常规的直接培养中，往往不能及时复苏，进入繁殖周期，所得检验结果常是“阴性”或计数偏低而“符合规定”的结论。 因此，在检验时须采用一些措施，利于被检菌的恢复从而提高阳性检出率。 （4）生境复杂 由于药品的种类繁多，剂型多样，使染菌的生境多样而复杂，在某些药品中大量繁殖，而在另一些药品中不能生长。 药物的pH、渗透压、含水量以及污染菌的检查常会出现不同的结果，如一些非水溶性油剂、软膏剂，由于其疏水性致使菌细胞与培养基成分隔离或因缺氧而难以生长。  2、药品微生物限度检查的基本条件 由于污染菌在药品中的不稳定性和诸多影响因素，为真实地反映药品的污染状况，除采用准确可靠的方法和对检验结果的正确判断外，尤须注意以下几项基本条件： 1）使用符合规定的培养基 使用符合规定的培养基是限度检查的最基础保障。而培养基的适用性检查尤为重要，2010版药典明确规定，实验用培养基必须经过适用性检查，结果符合规定方可使用。 2）保持供检样品的原污染状态 对供检样品提供原始污染状况的微生物检查数据是限度检查的基本任务。 药品的第二次污染及繁殖或死亡引起的状态改变均不能反应药品的微生物真实质量。 3）按规定抽样检验 由于药品染菌的随机性和不均匀性，欲从小量抽样检验反映整批药品的染菌状况是不可能的。 由于微生物限度检查是破坏性检查，检验一瓶破坏一瓶，增加抽验量及检验数量对提高检出率无疑是有利的，但抽量过多，生产、经营单位难以承受。 因此药典规定了检验量和数量。 4）适宜的供试液制备方法 正确制备供试液是保证检查结果可靠的前提条件，供试液制备的基本要求是，供试品必须均匀分散于供试液中，被检菌应受到必要的保护。 5）验证实验及对照实验 验证的目的主要是考察供检验品中有无抑菌活性物质干扰实验、检验方法和培养条件的可行性。若在确立新药检验方法及当检验条件变更时，如药品的组分、供试液制备方法或培养基变更等可能影响检验结果时，须重新做验证实验。 对一些已确立检验方法的品种，采用可行的供试液制备方法和固定的培养基，在进行常规法时可免去验证实验的繁琐步骤，制作一些必要的对照实验。通常的对照实验有二种，一种是阴性对照，另一种是阳性对照。 6）严格无菌环境及操作 实验操作应在环境洁净度10000级和局部洁净100级的单向流空气区域内或隔离