CYP2C19 显色型基因芯片的研究 - 中国医药生物技术.PDFVIP

中国医药生物技术 2015 年 2 月第 10 卷第 1 期 Chin Med Biotechnol, February 2015, Vol. 10, No.1 39 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.01.008 ·论著· CYP2C19 显色型基因芯片的研究 邢军芬，汪涛，张莹，朱滨 【摘要】 CYP2C19*2 和 CYP2C19*3 等位基因编码的酶无 目的 提供一种基于显色原理的 CYP2C19 基因芯片诊断 活性，是导致人体对经由 CYP2C19 代谢药物出现 方法。 代谢能力个体差异的主要原因。检测 CYP2C19 基 方法 采用碱性磷酸酶促显色原理设计制备固定有 *2 、*3 因型对临床开展个体化用药具有重要现实意义。建 检测探针的 CYP2C19 基因芯片，通过 EDTA 抗凝外周血 立并评价 CYP2C19 显色型基因芯片检测技术不 样本提取基因组 DNA ，PCR 扩增 CYP2C19*2 、*3 突变 论对产业发展还是临床应用都有积极的现实意义。 片段并与芯片在 43 ℃ 杂交，经洗涤、显色后扫描获取图像， 经软件分析输出基因型并对基因芯片性能进行系统评价。 1 材料与方法 1.1 实验材料 结果 CYP2C19 显色型基因芯片检出限为 20 ng 基因组 DNA ；与基因组 DNA 同等浓度鱼精 DNA 检测信号阴性； DNA 提取试剂盒（BST01051 ）、杂交显色试 用 *2/*2 、*1/*3 基因型样本重复检测 10 次，结果一致； 剂盒（BST03021 ）、醛基修饰基片（BSM03011 ）等 常见浓度的甘油三酯、总胆固醇、胆红素和完全溶血对测定 购自上海百傲科技股份有限公司。Taq 酶和 10 × 没有影响。临床三家医院临检实验室对 1000 例临床样本的 buffer 购自天根生化科技（北京）有限公司；dNTP 检测与双向测序方法比对验证，结果一致。 为上海生工生物工程服务有限公司产品；EDTA 抗 凝外周静脉血样本为上海市第一人民医院赠送；胆 结论 为高通量基因诊断产品的产业化提供了一种实用的 红素（纯度 98% ）购自上海源叶生物有限公司； 技术选择。 胆固醇（99% ）和甘油三酯购自上海将来实业有限 【关键词】 芯片分析技术； 多态性，单核苷酸； 基 公司。 因分型技术； CYP2C19 Bioer TC-96/G/H （b ）PCR 仪为杭州博日科技 中国医药生物技术, 2015, 10(1):39-44 有限公司产品；飞鸽 TGL-16GB 离心机为上海安 亭科学仪器厂产品；onedrop1000 紫外分光光度计 基因芯片技术（即基因微阵列），是近年来发 为上海诺晶生物有限公司产品；GSM417 点样仪为 展起来的一种快速、高效核酸分析手段，美国 美国 Affymetrix 公司产品；杂交检测设备，如 FDA 、中国 CFDA 均已批准基于基因芯片技术