Febit 新型微流体miRNA 表达谱芯片 - 生物通.PDFVIP

Febit 新型微流体miRNA 表达谱芯片 近年来，非编码小RNA 逐渐从配角变成了主角。miRNA 这个不起眼的小分子原来是基因表达的重 要调节器。它们还与多种癌症相关，也就理所当然成为药物靶点。另外一种在细菌中鉴定出的 piRNA 也是反式作用的小干扰RNA，虽然现在研究得较少，但也是前途无量。 随着检测方法的成熟，miRNA 的数量呈爆炸 式增长。在2004 年，总共只有719 个，但到了今 年9 月，miRBase 数据库中的miRNA 序列信息已 超过一万条。miRNA 变化如此之快，如果没有最 新最全面的工具，我们如何能跟得上它的脚步？ 目前市场上高通量检测 miRNA 的平台是芯 片，它能同时测量成百上个miRNA 的表达。不过 这些芯片大多需要事先标记。而德国Febit 公司采 用了另一种微阵列方法，叫作微流引物延伸检测 与传统的 RNA-预处理，Klenow 延伸列阵检 （Microfluidic Primer Extension Assay，MPEA）， 测（RAKE）相比，MPEA 也显示出几点主要优势。 这种检测方法以 Febit Geniom®微阵技术的使用 RAKE 微数列通过与其相应的寡核苷酸的 5’末端 为基础，miRNA 在杂交前无需标记。接着，DNA 结合于表面，而 MPEA 阵列的寡聚核苷酸捕获探 聚合酶I 的Klenow 片段直接加入微量流动芯片的 针与其3’末端相连。MPEA 的这种结合方式不仅排 通道中，相应的miRNA 得以特异延伸。此方法将 除了探针的自身延长，尤其重要的是说明这种延长 杂交检测的特异性与酶延伸的高辨别能力相结合。 作用远离微通道管腔表面而没有任何位阻。由于微 MPEA 相对于现有的其它微阵列方法，显示出 流体通道的使用,也大大降低了所需RNA 样本量。 不少优势。由于miRNA 不需经过富集、PCR 扩增 MPEA 具有高度的灵敏性，无需扩增，就足以检测 或标记等预处理而直接导入，这样就确保避免了实 出来源于福尔马林固定样本，组织针孔吸取样本或 验误差的产生（见图, A 为常规杂交方法，B 为微 激光捕获显微分离样本的纳克级的总RNA。 流引物延伸）。传统的杂交检测最适合鉴别杂交靶 最近，吉奥生物和德国 Febit 联合推出了和 点中心位点上的错配，相比之下，MPEA 提供了更 Sanger miRBase 14.0 同步的 miRNA 表达谱芯 高水平的灵敏度，由于酶催化的延伸仅在3’末端几 片。芯片采用独特的 Geniom 微流体技术，即时 乎完全配对时才会发生，因此很少会出现交叉杂交 酶标方法，以及全自动化的芯片处理，以极少量样 信号。 本实现高灵敏度、高重现性的精确检测。微流体微 点阵系统，具备灵活性以迅速地适应新的序列信 息。基于必威体育精装版数据资料，最佳化的捕获探针的合成， 是直接在生物芯片的微通道内完成的，从而保证了 第 31 页，共 37 页