猪三十九肽胆囊收缩素(CCK39)基因的克隆、表达.pdf

业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (5): 612~6 15 ·研究论文· 猪三十九肽胆囊收缩素( )基因的克隆和表达 军 成大荣 徐建生* 孙怀昌 唐 波 吕 玲 ， (扬州大学兽医学院 扬州225009) 邾 ： ，根据 摘要 以猪十二指肠中提取的总RNA 为模板 GenBank 已发表的猪三十九肽胆囊收缩素( )基因序列设计 1 对特 异性引物。用RT-PCR 扩增 基因的cDNA ，纯化后克隆 pUC 18 载体， H 玉/ R 玉双酶切后插 pGEX-6P-1 质粒获 得原核表达载体。0.5 mmol/L IPTG 诱导表达并纯化产物，以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备单因子血清；用抗GST 抗体和 自制的抗CCK39 的单因子血清Westen blot 检测融合蛋白。结果表明：成功地克隆出 基因的cDNA ，构建的原核表达载体 ，抗 ，证明获 pGEX- 成功地表达约32 kD 的融合蛋白 GST 抗体和抗CCK39 单因子血清能识别融合蛋白 得的融合蛋白具有 较好的抗原性，为制备抗CCK 抗体及研究CCK 的各种生理功能提供大量、低廉和抗原性较强的胆囊收缩素。邾 ： 关键词 胆囊收缩素; 克隆; 表达; 抗GST 抗体; 单因子血清 Cloning and Exprssion of Cholecystokinin-39( ) Gene of Pig CAO Jun CHENG Da-Rong XU Jian-Sheng* SUN Huai-Chang TANG Bo L Ling 邾 Based on the published nucleotide sequence of pig cholecystokinin-39( ) gene, a pair of primers were designed and synthesized. Total RNA was isolated from superior duodenal flexure of pig and used as template. The DNA fragments were ampli- fied by one-step RT-PCR and cloned into pGEX-6p- 1 vector. DNA sequencing confirmed that the sequence was identical to that of CCK39 published in GenBank. The recombined expression plasmid, pGEX- , was transformed into BL2 1 cell and induced with 0.5 mmol/L IPTG. SDSconfirmed that the fusion protein GST-CCK39 w