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食品理化检验维生素的测定资料.ppt

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(2)定量方法 标准曲线法: 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度,绘制标准曲线,再在相同条件下测量未知试样的荧光强度,在标准曲线上求出浓度。 (3). 操作步骤 ① 试样处理 样品匀浆(或粉碎)于低温冰箱中冷冻保存。 ② 提取 1) 水解 2) 酶解 称样 三角瓶 高压水解 盐酸溶液 调pH值 乙酸钠溶液 酶解 淀粉酶 定容 吸附剂采用的是人造浮石。 将提取液加入人造浮石交换柱中,VB1被吸附上去,吸附上去后,再用热水淋洗,洗去杂质,最后用热的酸性氯化钾(25%KCl-HAC)把VB1洗脱下来,这样就得到纯VB1。 样品 热水 酸性氯化钾 收集酸性氯化钾定容 ③ 净化 ④ 氧化 静置 → 过滤 → 脱水 反应瓶编号 标准A瓶 标准B瓶 样品A瓶 样品B瓶 加标准液或样品液 标准液5ml 标准液5ml 样品液5ml 样品液5ml 加氢氧化钠 3ml —— 3ml —— 加碱性铁氰化钾 —— 3ml —— 3ml 加正丁醇 10ml 10ml 10ml 10ml ⑤ 荧光强度测定(通过荧光分光光度计可以测得) 激发波长365nm;发射波长435nm; 激发波狭缝5nm;发射波狭缝5nm。 (4)方法说明 本方法适用于各类食物中硫胺素的测定,但不适用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响硫色素荧光物质的样品; 酸解、水解的目的:使结合型的VB1成为游离型的; 紫外线会破坏硫色素,所以硫色素形成后,反应瓶要用黑布遮盖或在暗室中进行荧光测定,并且要迅速测定; 维生素B2又称核黄素 测定方法主要有: 微生物法、荧光法、HPLC法 GB/T 5009.85-2003 荧光法(第一法) 微生物法(第二法) (三)维生素B2的测定 荧光法测维生素B2 1.原理 核黄素在440~500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S2O4),将核黄素还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。 为使VB2游离出来,采用需经酸解和酶解 为消除干扰,试样通过氧化处理和柱层析处理。 2.测定步骤 (1)样品提取 称样 三角瓶 高压水解 盐酸溶液 调pH值 氢氧化钠溶液 酶解 淀粉酶 定容 蛋白酶 (2)氧化去杂 样品提取液 具塞试管 水 双氧水 冰乙酸 高锰酸钾 氧化去杂 褪色 标准液按相同方法进行 (3)柱层析 样品液 水 丙酮-乙酸-水混合液 水 收集洗脱液 定容 *标准液按相 同操作进行 (4)荧光测定 激发光波长440nm,发射光波长525nm,测量样品管及标准管的荧光值。 待样品及标准的荧光值测量后,在各管的剩余液中加0.1mL 20%低亚硫酸钠溶液,立即混匀,在20s内测出各管的荧光值,作为各自的空白值。 3.计算 X:样品中核黄素含量,mg/100g A:试样荧光值 B:试样空白荧光值 C:标准荧光值 D:标准空白荧光值 m:样品质量,g m1:标准管中核黄素含量μg f:稀释倍数 100/1000:样品核黄素含量的换算系数 维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸; 广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂。 (三)维生素C的测定 维生素C具有较强的还原性,对光敏感,氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸,仍然具有生理活性;进一步水解则生成2,3 -二酮古乐糖酸,失去生理作用。 在食品中维生素C就是以还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型这3种形式存在的;食品分析中的所谓总抗坏血酸是指抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量,不包括2,3 -二酮古乐糖酸和进一步氧化的产物。 维生素C 的测定方法 测定维生素C 的方法有: 荧光法,高效液相色谱法,2,4 —二硝基苯肼比色法, 2,6 —二氯靛酚滴定法,等 GB/T 5009.86—2003 《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸含量测定方法》 第一法:荧光法 第二法:2,4—二硝基苯肼比色法 第十一章 食品中维生素的测定 Determination of Vita

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