第八章动物实验试卷.ppt

大鼠： 4～6周龄120～180g雄性SD大鼠，，腹腔注射卵白蛋白100mg抗原液1ml，灭活百日咳杆菌疫苗5×109个和氢氧化铝干粉100mg致敏。2周后用超声雾化器向箱内喷雾1％卵白蛋白，吸入20min激发。 评价： 表现呼吸气促，严重者呼吸减慢或节律不齐、轻度紫绀、四肢瘫软、行动迟滞或俯伏不动、反应迟钝，连续激发后大鼠体重减轻、毛色失去光泽、反应迟钝。本模型适用于特异性抗原抗体反应的研究，有速发和迟发双相反应。 邻苯二甲酸酐(PA)致变应性哮喘模型 机制： 苯酐是小分子化合物，属半抗原。由于半抗原不能刺激机体产生免疫反应，故需与蛋白结合成全抗原，形成新的抗原决定簇而发挥致敏作用。据此实验制备了两种不同载体的苯酐全抗原即PA-HAS和PA-BSA。用致敏的抗血清给正常动物注射使其致敏，并在相应抗原吸入攻击下同样可诱发出哮喘。 方法： 2-3月龄250—300g豚鼠。用30mg苯酐以lml丙酮溶解后，加入4℃2％HAS 9%碳酸氢钠溶液中，并搅拌1h形成PA—HSA。同法制备PA—BSA。将制备的抗原与弗氏完全佐剂等量研磨，使之成油包水状。腹腔或后腿肌肉注射0.2～0.3ml/只(含蛋白4-6mg)。注射3～8周后抗原吸入激发。动物俯卧固定，激发前描记正常的呼吸曲线。用1:1000 HSA盐水溶液雾化后吸入1～3min，观察记录0.5h。 模型评价： 豚鼠吸入抗原后1-10min内，表现为呼吸频率加快，由100—120次/min增加到140～160次/min；呼吸幅度增大，同时伴有咳嗽、喷啑，重者呼吸极度费力、挣扎，有短暂窒息甚至死亡。发作一般持续30～50min。 PA是确切的职业性致喘物质。苯酐哮喘属变应性哮喘，患者体内可测出特异性抗体，苯酐抗原吸入激发试验常呈现阳性。本模型的建立，为进一步研究该哮喘的病理变化提供了条件。 血小板活性因子(PAF)诱发哮喘模型 造模机制 PAF是目前已知的唯一能引起气道高反应性炎症介质。PAF引发哮喘发作的原因可能是PAF通过嗜酸性粒细胞的活化趋向、脱颗粒、释放嗜酸性细胞蛋白X(Epx)、嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)和碱性蛋白等细胞毒性物质引起气道上皮细胞损伤和脱落。另外，激活的嗜酸性细胞本身又合成和释放PAF，使这一过程加剧，最终引起气道高反应性。 方法: 300—500g雄性豚鼠，激发实验当天，采用含0.25%BSA生理盐水，将PAF稀释成500ug/ml，按1500ug/kg的剂量雾化吸入，即引起豚鼠哮喘发作。 评价: PAF激发豚鼠哮喘发作不需致敏过程，直接利用其特性而引发气道的高反应性，本模型主要用于研究哮喘病因学和发病机制的研究。 * （四）消化系统疾病动物模型－幽门螺杆菌感染动物模型 简述：胃腺体消失，上皮细胞脱落、溃疡形成及黏膜固有层炎性细胞浸润。 方法：小鼠口服10^6细菌。 时间：1-8周后 特点：胃黏膜病理变化与人感染的Hp变化相似。 应用：研究Hp感染的病理过程及细菌疫苗。 肝纤维化动物模型 模型概述： 任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于肝脏，均可产生肝细胞变性、坏死，继而肝细胞再生和纤维组织增生，导致肝纤维化。 已有化学性损伤、免疫性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模型。每种方法因致病因素不同，给药途径不同，产生肝硬化的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度等都不尽相同。 造模方法： 1.免疫法： 免疫性肝纤维化产生的机理是Ⅲ型变态反应引起，白蛋白和血清的大分子物质，作为异种抗原进入大鼠体内后，刺激其产生相应的抗体，当抗原再次进人机体后抗原抗体结合，形成抗原—抗体免疫复合物(IC)，抗原的反复、长期刺激，过量的免疫复合物来不及被清除，沉积于肝脏的血管壁内外，引起血管炎，造成肝损伤。反复导致肝细胞变性、坏死，再生，纤维增生等变化，最后发展为肝纤维化、肝硬化。 动物选用雄性Wistar大鼠，体重130g左右。取猪血清0.5ml，腹腔内注射，每周2次，共8次(猪血清的制备：取新鲜猪血，离心制血清，滤过除菌，分装放低温冰箱备用)。 评价: 大鼠第3周出现肝细胞变性、坏死，第4周增生的胶原纤维形成纤维束，从中央静脉到门管区之间相互伸延，发生纤维化。 模型特点： ①肝纤维化出现早，出现率高； ②动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常； ③纤维化组织中大量胶原增生，Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA增多。 慢性活动性肝炎患者循环免疫复合物多为阳性，猪血清模型可用慢性肝炎