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通过调节水相pH值和KCl浓度来实现三种蛋白质的分离。在pH=9时,核糖核酸酶的溶解度很小,保留在水相而与其他两种蛋白质分离;相分离后得到的反胶团相(含细胞色素C和溶菌酶)与0.5 mol/L的KCl水溶液接触后,细胞色素C被反萃取到水相,而溶菌酶留在反胶团相;含溶菌酶的反胶团与2.0 mol/L KCl,pH值为11.5的水相接触后,将溶菌酶反萃至水相中。 案例二: 使用二级混合-分离型萃取流程,用TOMAC/0.1%辛醇-异辛烷的溶液体系连续分离?-淀粉酶,浓缩了17倍。(图) 案例三 : 胞内酶的提取 第八章 反胶团萃取 1.概念:反胶团;反胶团的临界胶团浓度 2.反胶团萃取的优点有哪些? 3.如何用反胶团萃取技术分离核糖核酸酶a、细胞色素c和溶菌酶? 作业: 人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 * 微胶团:水溶液中 表面活性剂的极 性头朝外,疏水 的尾部朝内,中 间形成非极性的 “核” 水 非极性的“核” 极性“头” 非极性“尾” 反胶团: 表面活性剂的极 性头朝内,疏水 的尾部向外,中 间形成极性的“核” 非极性有机溶剂 极性“头” 极性的“核” 非极性“尾” 反微团内溶解的水称为微水相或水池 第八章 反胶团萃取 一、概述 反胶团(Reversed Micelles)是两性表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的,内含微小水滴的,空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。是一种自我组织和排列而成的,并具热力学稳定的有序构造。 反胶团的微小界面和微小水相具有两个特异性功能: (1)具有分子识别并允许选择性透过的半透膜的功能; (2)在疏水性环境中具有使亲水性大分子如蛋白质等保持活性。 反胶团萃取的优点 (1)有很高的萃取率和反萃取率并具有选择性; (2)分离、浓缩可同时进行,过程简便; (3)能解决蛋白质(如胞内酶)在非细胞环境中迅速失 活的问题; (4)由于构成反胶团的表面活性剂往往具有细胞破壁功效,因而可直接从完整细胞中提取具有活性的蛋白质和酶; (5)反胶团萃取技术的成本低,溶剂可反复使用等。 二、反胶团的形成 1、反胶团的构造: 在胶体化学中我们知道,如向水溶液中加入表面活性剂,并使其浓度超过一定数值时,表面活性剂就会在水相中形成胶体或微胶团,它是表面活性剂的聚集体。其亲水性的极性端向外指向水溶液,疏水性的非极性“尾”向内相互聚集在一起。 当向非极性溶剂中加入表面活性剂,并使其浓度超过一定数值时,也会在非极性溶剂内形成表面活性剂的聚集体。与在水相中不同的是,其疏水性的非极性尾部向外,指向非极性溶剂,而极性头向内,与在水相中形成的微胶团方向相反,因而称之为反胶团或反向胶团。 构成反胶团的表面活性剂种类: 阴离子表面活性剂 AOT(琥珀酸二酯磺酸钠,P154图8-2) 阳离子表面活性剂 季铵盐 非极性有机溶剂:环己烷,庚烷, 辛烷等 分离蛋白质时, 使用最多的是阴离子型表面活性剂AOT。 2、反胶团的物理化学特性及制备 (1)反胶团的物理化学特性 ① 反胶团的临界胶团浓度 表面活性剂在非极性有机溶剂中能形成反胶团的最小浓度 ② 反胶团含水率W W=C水/C表 W越大,反胶团的半径越大 (2)反胶团的制备 ① 注入法 ② 相转移法 ③ 溶解法 三、 生理活性物质的分离农缩 1、反胶团萃取原理 蛋白质进入反胶团溶液是一协同过程。在有机溶剂相和水相两宏观相界面间的表面活性剂层 ,同邻近的蛋白质分子发生静电吸引而变形 ,接着两界面形成含有蛋白质的反胶团 ,然后扩散到有机相中 ,从而实现了蛋白质的萃取。(可能机理) 改变水相条件 (如pH值、离子种类或离子强度 ) ,又可使蛋白质从有机相中返回到水相中 ,实现反萃取过程。 2、蛋白质的溶解 a、水壳模型:蛋白质位于水池的中心,周围存在的水层将其与反胶团壁隔开; b、半岛模型:pro表面存在强烈疏水区,该区直接与有机相接触; c、pro吸附于反胶团内壁; d、pro疏水区与几个反胶团的疏水尾发生相互作用,被几个小反胶团所“溶解”。 3、反胶团萃取 1)分离场-分离物质的相互作用 溶解推动力 ①静电
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