单基因遗传病的研究方法与技术2013.ppt

家系连锁分析来定位: 适于分析较大的遗传病家系，不适于散发病例和小家系病例 二代测序技术： 适于散发病例和小家系病例 研究对象不同，策略方法不同 连锁分析与二代测序相结合加快新基因的发现 A T G G T C T C A C T G C A A C C G A T G G T C T C A C T G T A A C C G Met Val Ser Leu Gln Pro Met Val Ser Leu Stop 定位克隆 利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 DNA STR SNP 常见遗传标记 PCR-STR连锁分析 CA CA CA Primer 1 Primer 2 CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA 毛细管电泳分析PCR片段大小 分析 D4S1534 D4S2929 D4S2460 D4S423 I-1 114,124 176,178 200,202 105,112 II-1 114,120 153,159 200,202 107,109 II-2 114,124 157,176 202,204 105,112 II-3 114,122 157,178 200,202 102,105 II-4 114,124 157,176 202,204 105,112 II-5 114,124 157,176 198,202 107,109 III-1 114,124 153,176 200,202 109,112 III-2 114,124 176,176 202,202 109,112 连锁分析结果 均匀分布于23对染色体上的STR SNP芯片 通过全基因组扫描来定位基因 外显子组测序 用二代测序技术寻找致病基因 全基因组测序 基因功能相关分子遗传学研究方法 —— 隐性突变往往导致失去功能（loss of function） —— 显性突变可导致获得功能（gain of function）和失去功能 失去功能：单倍剂量不足（halpoinsufficency） 获得功能：显性负效应（dominant negtive） 隐性突变和显性突变的致病机制 基因突变对基因功能的影响及发病机制研究 将目的基因cDNA克隆到合适载体 应用定点突变方法建立突变基因载体 体外功能研究：应用分子生物学技术研究与正常基因相比突变基因突变有否功能差异。 细胞水平功能研究，突变基因转然细胞内，顺时转染或建立细胞系，研究其所引起细胞功能改变及其可能信号转导通路。 将目的DN片段克隆到质粒载体 建立遗传病动物模型 隐性遗传病： 往往因基因失去功能所致，适于建立基因敲除动物模型，纯合突变会表现出人类疾病相似表型 显性遗传病： 失去功能引起单倍剂量不足，适于建立基因敲除动物模型，杂合突变动物会表现出人类疾病相似表型，纯合突变往往致死。 获得功能导致显性负效应，适于建立转基因动物模型，杂合突变会表现出人类疾病相似表型，纯合突变往往表型更重。 Thank you! * * * * * Most researchers are well versed in the performance of PCR. However, I usually emphasize that the performance of Real-Time PCR requires an emphasis on each step. STEPS 1) Prepare the Master Mixture and add all components to the reaction tube. 2) Denature the Template to generate single-stranded DNA. Usually performed at 95 oC for 30 to 60 s. 3) Annealing temperature. The temperature is lowered in order to promote the binding of the primers to its complimentary target. Generally ranges between 50 and 65 oC. * Starts with