第2章细胞工程研究常用设备和技术.ppt

细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。 一、基本实验室 准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，其余应密闭。 培养室：培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 二、辅助实验室 细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 细胞工程实验室布局的其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。 超净工作台是以空气过滤去除杂菌孢子和灰尘颗粒来达到空气净化目的的装置，主要由鼓风机、滤板、操作台和照明灯组成。 单人和双人，垂直和平流； 75%酒精擦拭超净台，放入器械，开紫外灯30min，关闭紫外灯，点燃酒精灯在下火焰方进行操作。 传染病的传染性和危害性并不相同，传染病原分为四个危害等级。 第一级危害群微生物：与人类成人健康和疾病无关； 第二级危害群微生物：引发人类患病，但很少出现严重情况，通常有预防及治疗方法； 第三级危害群微生物：引发人类患病，并出现严重或致死情况，但可能有预防和治疗方法； 第四级危害群微生物：引发人类患病，并出现严重或致死情况，但通常无预防与治疗方法，诸如炭疽杆菌、霍乱弧菌、埃博拉病毒、天花病毒等。 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡24h，再用洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。 已使用过的试管、烧杯、三角瓶等，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。 用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。 载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。 塑料用品洗涤：塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤：金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，并保持干燥。 八、培养箱 细胞在离体培养时，都需要一定的温度，尤其是哺乳动物细胞的要求较高，在多数情况下温度变化不能超过±0.5℃。 动物细胞培养 恒温培养箱包括能控制和调节温度的一般培养箱为增加了湿度和CO2调节的二氧化碳培养箱。 植物细胞培养 增加了照明条件的光照培养箱、人工气候箱。 九、显微镜 体视显微镜（解剖镜）：用于观察和剥离较小器官和组织，也可用来观察愈伤组织的生长和发育。 透射显微镜：物镜在载物台上方，用于观察切片、压片、涂片等。 倒置显微镜：物镜在载物台下方，可以从培养皿、培养瓶或摇瓶的下方观察培养物，用来实时观察活细胞的生长情况。 显微操作系统：用于对细胞进行显微操作，如细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割等工作。 第三节 基本技术 1．洗涤液 铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。 一、洗涤技术 弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。 中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。 强 浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。 玻璃器皿洗涤 塑料用品洗涤 金属用品洗涤 2．洗涤方法 不同材料的器械，洗涤方法不同。 * * * 第二章 细胞工程研究常用设备和技术 实验室设计 实验室常用仪器设备 基本技术 培养基及其配制 主要内容 第一节、实验室设计 基本实验室-培养室 第二节 实验室常用仪器设备 一、水纯化装置 用于细胞工程的培养基和其他溶液一般都要用双蒸水或三次蒸馏水来配置。 实验室常用的纯水装置：不锈钢蒸馏水器、石英自动纯水蒸馏器、超纯水装置。 不锈钢蒸馏水器 主要由多个过滤部件组成