实验四种血液样本和组织样本的准备.ppt

实验五：血液生化样品处理 及组织样品的制备;目的要求;一、血液生化样品制备;血清的制备;全血及血浆的制备;常用抗凝剂的使用方法;草酸钾一氟化钠混合剂。;肝素;乙二胺四乙酸二钠盐(简称EDTANa2);血浆的制备;无蛋白血滤液的制备 ;钨酸法 ;方法与步骤： ①取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；②用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解； ③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置5～10min，使其酸化完全；④加入10％钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液，供测定用。 用???法制得的无蛋白血滤液为10倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于全血0.ml，适用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。;三氯醋酸法 ;方法与步骤：①取9份10％三氯醋酸放人锥形瓶中；②加入抗凝血1份，边加边摇，静置5min；③过滤或离心，即得完全澄清的无蛋白血滤液，此液亦为10倍稀释之血滤液。 附注 (1)等无蛋白血滤液时，各液加妥后，摇匀不应有泡沫，否则表明蛋白质沉淀不完全。 (2)所得无蛋白血滤液均应是五色透明的液体，如呈粉红色则说明蛋白质沉淀不完全。 ;二、离心机使用方法;离心分离技术是根据物体在一个实用离心场合中的状态而发展起来的新技术。不同密度、大小或形状的物质在不同速度的离心场合中沉降，所以一个大体是球形非均一的混合物，可以用离心的方法加以分离，离心机是为了进一步研究生物化学、分离大量的物质。例如：收集细胞，分离血浆。从这些预纯化的制剂中分离DNA和蛋白质分子，并可分离出病毒和大规模大肠杆菌、亚细胞成份、核蛋白微粒。 ;使用方法;注意事项