《临床检验诊断学》讲义1肿瘤相关基因.pptVIP

研究生讲义 全球恶性肿瘤的流行状况 2000年世界癌症发病1,006万人，死亡621万人，现患2241万人。发病与死亡比10年前增长约22%。 恶性肿瘤流行特征 （一）时间趋势 （二） 地区分布 （三） 人群分布 北美、北欧、西欧、大洋洲 — 结肠直肠、乳腺、前列腺 例外：大洋洲以黑色素瘤为主 中欧、南欧 — 胃癌、膀胱癌 亚洲东部(含日本、中国) — 胃、食道、肝脏 — 发达地区：肺、结肠直肠、乳腺 — 欠发达地区：分布模式不清晰 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 癌基因及其产物的检测方法　　检测癌基因及其产物的标本可以是实体瘤和体液，前者需要提取DNA或RNA进行检 测，或经过组织切片以免疫组化方法检测基因表达产物，或者采用血尿标本，用 ELISA等法检测癌基因蛋白，几种主要检测方法介绍如下. (一)Southern杂交法 (二)原位杂交 (三)酶联免疫吸附试验 (四)免疫组化染色（五)PCR技术 (六)PCR相关技术 1.PCR-RFLP技术:PCR-RFLP全称多聚酶链反应(PCR)一限制性片段长度多态性 (restriction fragment length Polymorphism，RFLP)分析.PCR-RFLP主要有2个环 节:(1)靶基因PCR扩增;(2)扩增的DNA片段限制性酶切图谱(长度多态性). PCR -RFLP主要用于核酸变异性分析与比较。 2、PCR-SSCP技术:PCR-SSCP是聚合酶链反应一单链构象多态性分(single strand conformation polymorphism)的简称，原理是将经扩增的DNA片段经过变性处 理，形成单链，由于序列不同，单链构象就有差异在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁 移率不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无突变. 　　PCR-SSCP分析法己广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失 突变，基因的多态性分析等.。 　3.PCR-southern blot: 或Dot blot技术是将PCR扩增产物转移到硝酸纤维膜或尼 龙膜上，再与标记的特异性探针进行杂交，然后放射自显影，来检测有无特定的扩增 片段及相对含量，现己广泛应用于癌基因:遗传特异基因，病 原体特异基因等方面的研究及检测 （五）原癌基因的甲基化程度降低而激活 DNA分子中的甲基化对于保持双螺旋结构的稳定， 阻抑基因的转录具有重要作用。 结肠癌和小细胞肺癌细胞中c-ras基因甲基化水平降低  第一节癌基因 一.癌基因的概念与分类 二.癌基因的激活机制 三癌基因的检测方法 第一节癌基因 概述 1.癌基因(oncogene)：细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因称为癌基因。癌基因是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性。在癌基因异常表达时，其产物可使细胞无限分裂。 2.原癌基因(proto-oncogene):细胞基因组中处于不表达或其表达不引起正常细胞发生恶性转化的癌基因称为原癌基因。(正常细胞内未被激活的癌基因) 一、癌基因的概念与分类 第一节癌基因 概述 3.病毒癌基因(v-onc)：每一种细胞中的癌基因，都能在相应的病毒基因组中发现其同源基因，即病毒癌基因。(病毒所携带的致转化基因) 4.细胞癌基因（c-onc）正常细胞内也存在病毒癌基因的同源序列。具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能 。 癌基因的概念与分类 第一节癌基因 概述 C-onc、v-onc的不同之处： 1.病毒癌基因与细胞癌基因相比，通常丢失了两端的某些序列。 2.病毒癌基因没有内含子，而细胞癌基因中通常含有内含子或插入序列。细胞癌基因的外显子序列是极为保守的，这表明他们编码的蛋白质产物在进化上的重要性。例如人和鼠的c-src基因的蛋白产物分子量为60KD,脊椎动物中所含的3个c-ras基因（c-H-ras, c-K-ras,c-N-ras ）的蛋白质产物的分子量也都是21KD。 癌基因的概念与分类 第一节癌基因 3.病毒癌基因与同源的细胞癌基因在外显子序列中也有微小的差别，如病毒的v-H-ras基因与人的c-H-ras基因所编码的蛋白质中的确189个氨基酸中有7个氨基酸不同，致转化能力v-ras强。 4.病毒癌基因常会出现碱基取代或碱基缺失等突变，细胞癌基因较少 。 第一节癌基因 癌基因的特点 1.癌基因是存在于正常细胞中，有时间，空间限制的表达并具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。 在百亿年前早已存在，从单细胞