中量大量组织细胞基因组DNA提取试剂盒操作方法与步骤说明书.doc

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒目录号：D目录编号 包装单位 D01 20次 D02 50次 适用范围： 适用于快速提取各种动植物细胞/组织基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 20次 50次 细胞核裂解液 室温 180 ml 450 ml 蛋白沉淀液 室温 60 ml 150 ml DNA溶解液 室温 10 ml 20 ml RNase A(10mg/ml) -20℃ 360 μl 900 μl 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒用于快速的从动植物细胞/组织中提取基因组DNA。样品研磨或者匀浆后加入细胞核裂解液，首先在强去污剂或者和蛋白酶K协同作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。 产品特点： 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。 快速，简捷，组织样品操作整个过程可在1个小时内完成。 结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到3,000xg，可容纳50ml离心管的台式离心机。 用户需自备异丙醇、70％乙醇、PBS(用于细胞)、液氮研钵/或匀浆器(用于组织)、水浴箱。 开始实验前将需要的水浴先预热好备用。 本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的组织细胞量，请联系我们索取其它处理量的操作手册。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 组织培养细胞 收集6-8×107个细胞到一个50 ml离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。 500 x g离心5分钟，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约100μl残留的液体。 加3 ml PBS重悬洗涤细胞，重复上一步骤，高速涡旋振荡重悬细胞团。 对于细胞核裂解液裂解效果不好的细胞系（例如PC12细胞），在做下一步骤前，应该做几次冻融循环：冻于液氮后，在95℃水浴融化，重复4次。 加入9 ml细胞核裂解液，用大口径的枪头（剪去枪头尖）轻柔吹打裂解细胞直至看不见细胞团块(如有必要可以37℃温育帮助裂解)。 接操作步骤项下4。 动物组织（例如鼠肝脑） 9 ml冰预冷的细胞核裂解液加入300mg新鲜或者解冻的组织，匀浆器匀浆完全，将裂解物转入50ml离心管。另一种方法：在液氮中研磨300mg组织成细粉后，转入装有9ml 冰预冷细胞核裂解液的50ml离心管，?用大口径枪头吹打混匀。 将裂解物放置在65℃水浴15-60分钟。 如果需要最大的产量，可加入45μl蛋白酶K (20mg/ml)，颠倒25次混匀，55℃水浴3小时或者过夜。直到组织溶解，中间不时颠倒混匀。 接操作步骤项下4。植物组织 在液氮中研磨植物组织（200m干组织或400mg湿组织）成细粉后，转入装有9ml冰预冷的细胞核裂解液的50 ml离心管，?用大口径枪头吹打混匀。 植物组织起始处理量应该根据叶龄、种类、基因组大小调整。 将裂解物放置在65℃水浴15-60分钟，期间至少颠倒10次。 加入18μl RNase A（10mg/ml）至裂解物中，即RNase A终浓度30μg/ml，颠倒混匀25次后，37℃温育15-60分钟去除残留RNA。然后室温冷却至少5分钟或者冰浴使回复到室温。 在回复到室温的裂解物内加入3ml蛋白沉淀液，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5分钟。 由于样品体积重量小，用涡旋振荡器振荡混匀产生的剪切力并不会剪切打断基因组DNA。如果用手振荡混匀，则不可以用手上下剧烈振荡混匀，只能适当力度振荡混匀，否则会剪断基因组DNA； 但是力度也不能太小，要保证充分混匀，将粘稠的裂