Beagle犬口服雷公藤片血浆中雷公藤红素LCMSMS测定及药动学研究お.doc

Beagle犬口服雷公藤片血浆中雷公藤红素LCMS/MS测定及药动学研究?お? 　　[摘要]建立Beagle犬血浆中雷公藤红素的LCMS/MS检测方法，用于Beagle犬口服雷公藤片的药代动力学研究。血浆样品经二氯甲烷提取，色谱条件为Phenomenex Luna C8色谱柱（20 mm×50 mm， 3 μm），流动相为甲醇乙腈异丙醇溶液（1∶1）01%甲酸 1.5∶5.5∶30；多反应监测（MRM）雷公藤红素（[M+H]+，m/z 4.5.1.3/201.1）和内标泼尼松龙（[M+H]+，m/z 3.61.1/1.4.71）； DAS 10软件对雷公藤红素药时曲线进行拟合，并计算药代动力学参数。在0680 0～1.3.60 μgL-1，雷公藤红素与内标的峰面积比值与浓度的线性关系良好，定量限为0680 0 μgL-1，日内日间精密度小于61.5%，提取回收率为504.2%～5.1.65%。Beagle犬口服雷公藤片（1片/kg），血浆中雷公藤红素经时变化符合一室模型（w=1/cc），主要药动学参数分别为Cmax（3.5.64±95.40） μgL-1，Tmax（2.62±069） h，T1/2（2.93±02.9） h，CL（0308±005.6） Lkg-1?h-1，AUC01.2（1.3.1.1.6±3.1.94） μgL?h-1，AUC0∞ （1.4.2.83±3.75.7） μgL?h-1。建立的LCMS/MS分析方法准确灵敏，适于雷公藤片中雷公藤红素药代动力学研究 [关键词]雷公藤红素； 雷公藤片； 高效液相色谱质谱联用； 药代动力学 雷公藤红素主要来源于中药雷公藤的根皮，文献报道[12]，雷公藤红素具有显著的生物活性，如抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等，是临床治疗类风湿病雷公藤片、雷公藤多苷片等制剂的主要有效成分之一。作为雷公藤属植物里面第一个被分离得到的化合物和雷公藤的主要活性成分，对雷公藤红素的提取纯化工艺、药理活性研究和制剂中含量分析均已有文献报道[3]，但雷公藤制剂中雷公藤红素的体内过程鲜有报道。因此作为雷公藤制剂中主要活性成分和毒性成分，有必要对其进行体内药代动力学研究。本实验通过建立Beagle犬血浆中雷公藤红素的LCMS/MS检测方法，以雷公藤片为受试制剂，对Beagle犬单剂量口服雷公藤片（1片/kg）中的雷公藤红素进行药动学研究，计算药动学参数，为临床药动学研究提供参考依据 1材料 API4000 LCMS/MS联用仪，色谱工作站（Analyst 1.4.2）；梅特勒托利多AE2.40电子天平；Biofuge PrimoR冷冻高速离心机；DrictQ5超纯水机；Organomation氮吹仪 雷公藤片，三九黄石制药厂生产，每片含雷公藤红素3.5.6 μg，批号100204.1Z；雷公藤红素对照品（南京泽朗医药科技有限公司，批号ZL091.108，纯度99%）；泼尼松龙（内标，批号1001.5.3.1.99603，中国食品药品检定研究院）；试验用水为超纯水，甲醇为色谱纯，其他为分析纯试剂 健康6～1.2月龄Beagle犬8只，雌雄各半，体重（1.3.5.1±065） kg，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（苏试验前驯养观察2周 2方法 2.1犬血浆中雷公藤红素LCMS/MS测定 2.1.1色谱与质谱条件Phenomenex Luna C8色谱柱（20 mm×50 mm， 3 μm）；流动相甲醇乙腈异丙醇溶液（1∶1）1‰甲酸 1.5∶5.5∶30，流速2.50 μLmin-1；柱温3.5 ℃ 质谱条件：离子源为ESI源；离子源电压5 500 V；离子源温度300 ℃；正离子方式检测；扫描方式为多反应监测（MRM）；用于定量的离子分别为雷公藤红素，m/z 4.5.1.3/201.1[M+H]+，泼尼松龙（内标），m/z 3.61.1/1.4.71[M+H]+ 2.1.2对照溶液配制精密称取雷公藤红素1088 mg，置于10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得1 088 mgL-1雷公藤红素的储备液；再以甲醇溶液依次稀释，配成质量浓度分别为1 3.60，6800，2.720，1.3.60，6800，2.720，1.3.60，6800 μgL-1的雷公藤红素系列浓度对照溶液。同法制备含雷公藤红素分别为1 088，1088，1088 μgL-1高、中、低不同浓度质控标液 内标泼尼松龙对照溶液的配制：精密称取泼尼松龙对照品993 mg，置于2.5 mL量瓶中，加入甲醇溶解，超声10 min，定容至刻度，摇匀，即得3.972 mgL-1泼尼松龙储备液，再以甲醇溶液稀释至质量浓度为3.972 μgL-1的内标溶