【实验原理】 将发酵培养基煮沸灭菌.ppt

微生物工程 实验 实验二 黑曲霉产木聚糖酶液态发酵工艺的优化 实验三 发酵罐的演示使用 （4）接种 在接种口周围放置浸有酒精的棉花，点燃后，在火焰中加入种子液，通常接种量为发酵培养基体积的1％～5％。拧紧接种口后，调节搅拌速度，开始培养发酵液。 （5）发酵结束 发酵结束后，取出发酵液和各种电极，清洗发酵罐。 实验四 酸奶的制作 实验五 米酒的制作 （5）固态糖化 接种匀拌后的米饭可装三角瓶发酵。所用容器都应预先洗净，并用开水浇淋浸泡过，以杀死大部分细菌。温度可控制在30℃左右，发酵初期可见米饭表面产生大量纵横交错的菌丝体，同时米饭的黏度逐渐下降，糖化液渐渐溢出和增多。 * * 课程简介： 本实验课程可面向全校生物技术相关专业本科生，共有学时数20学时，实验教学内容包括：“产酶微生物的分离与筛选”、“发酵罐的操作演示”等。实验教学中包括演示型、技能型和设计型实验环节，全面提高学生的实际操作能力、综合设计能力和应用能力。 实验一 产酶微生物的分离与筛选(操作性) 4学时 实验二 黑曲霉产木聚糖酶液态发酵的工艺优化(设计性) 实验三 发酵罐的演示使用(操作性) 实验四 酸奶的制作(操作性) 实验五 米酒的酿制(操作性) 目 录 实验一 产酶微生物的筛选 通过本实验的学习，使学生具备能通过查阅资料自己单独设计实验方案，从自然界中筛选出所需的发酵微生物的能力。 同学们根据自己选择的实验题目，查阅资料得到的信息，自己列出筛选原理。 【实验目的】 【实验原理】 1.同学们从淀粉酶产生菌的筛选”、“蛋白酶产生菌的筛选” 这两个个实验题目中任选一个 ，通过查阅资料，列出实验方案，实验方案包括如下内容： 如何取样 筛选培养基的组成 如何判断平板上的菌株是所筛的微生物 所需的试剂材料清单 【实验步骤】 2.老师和学生共同讨论同学们交上来的实验方案，并根据实 验室的具体情况来讨论实验方案的可行性。 3.老师根据共同讨论后确定的实验方案，为学生们准备好 所需试剂仪器。 4.同学们单独完成实验，如个别同学实验失败，需重新设计方案，再在空余时间完成实验，知道实验成功为止。 【实验步骤】 学习用正交设计的方法进行发酵工艺的优化 发酵培养基的优化一般可通过下面的步骤进行。根据前人的经验和培养基成分确定时一些必须考虑的问题，初步确定可能的培养基成分；通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分；当培养基成分确定后，剩下的问题就是各成分最适的浓度，由于培养基成分很多，为减少实验次数常采用一些合理的实验设计方法。 【实验目的】 【实验原理】 1.同学们根据实验指导书上提供的因素水平表，设计4因 素3水平的正交实验；并根据正交实验安排，全班分9各组，每个组做一个实验号。 2.每个组同学，根据正交实验安排表所对应的试验号的因素水平，配制培养基，培养基灭菌冷却后接入一环 黑曲霉孢子，于30℃、150转/分钟下培养3天 3.发酵结束后，用纱布过滤，收集发酵液，并测定发酵 液的木聚糖酶酶活 【实验步骤】 4.木聚糖酶酶活测定 （1）酶活定义 以木聚糖为底物，在40 ℃，pH4.6的条件下，每小时酶解产生1mg木糖定义为一个酶活力单位，单位为u/mL。 （2）标准曲线的制作 分别吸取木糖标准液0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL，依次加入7支50 mL比色管中，以蒸馏水补加到2.00 mL，再各加入DNS试剂1.50 mL，在沸水中煮5分钟，冷水冷却后，用蒸馏水定容至25 mL，摇匀，在540 nm处，用空白管溶液调零点，记录其吸光度值。以木糖的质量和相对应的吸光值计算回归方程。 【实验步骤】 （3）酶活测定 将稀释好待测酶液加1mL于25 mL比色管中，然后放入40℃的恒温水浴锅中保温5分钟，加入 1 mL木聚糖溶液，保温30分钟，使酶与底物充分反应，之后加入 1.5 mL DNS试剂中止反应。对照管先加1 mL待测酶液，再加1.5 mLDNS，摇匀，使酶液失活，然后再加1 mL木聚糖溶液，同上面的一起迅速放入沸水中水浴 5分钟进行显色反应，取出后，用蒸馏水定容到25 mL，充分混匀后于分光光度计上在540nm处测定其吸光值。并计算酶活大小。 4. 全班9组同学把每组实验结果汇总，并根据汇总的结 果，进行正交实验分析，确定培养基最佳配方 了解小型玻璃罐的构造以及其使用方法。 好氧发系统由