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2011艾滋病基础技术培训 济南市CDC 潘晶 什么是艾滋病病毒（HIV） HIV属于逆转录病毒科，慢病毒亚科，单链双拷贝RNA病毒。 病毒颗粒：呈20面体立体对称球形，表面有刺突状结构的糖蛋白，分为包膜和核心两部分 艾滋病的传播途径 经血液传播：输血、静脉吸毒等。 经性传播：异性、同性、双性。 垂直传播：母婴经胎盘传播。 艾滋病的检测方法 快速检测：胶体金/硒、明胶凝集、唾液检测卡等。 敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。 优点：简单、快速。 缺点：不稳定、假阴/阳性 常用筛查实验：酶联免疫（ELISA）、化学发光等。 确证检测：免疫印迹实验（WB） 其他检测方法：核酸检测等 什么是ELISA方法 什么是ELISA方法 目前使用的ELISA试剂多为第三代及第四代ELISA试剂。 第四代试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4-9.1天，其优点在于能同时检测抗原、抗体，降低血源筛查的残余危险度。 什么是ELISA方法 什么是ELISA方法 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：① 固相的抗原或抗体，② 酶标记的抗原或抗体，③ 酶作用的底物，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的条件，可设计出各种不同的检测方法。 什么是ELISA方法 ELISA的成品试剂盒中包含以下各组分： (1)已包被抗原或抗体的固相载体(96孔板); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物（缓冲液和底物液或称A/B液）; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中) (5)有些试剂盒中还有标本的稀释液; (6)洗涤液（基本为通用的浓缩磷酸盐溶液）; (7)酶反应终止液（一般为弱硫酸液） 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。 什么是血清：抽取静脉血，置于普通试管内，室温下自然放置1?2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。 什么是血桨：抗凝静脉血，抽取静脉血后，置于加有EDTA或肝素等抗凝剂的试管，颠倒混匀数次，可用于CD4细胞检测。离心分离出的上清液为血桨。 血浆与血清的区别是上清液中存在纤维蛋白，容易产生假阳性。因此尽量上送血清样品。 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。 血液样本应及时检测，一般10个工作日内必须出具报告。 各筛查实验室必须对样品进行ELISA或化学发光法检测。不能只进行快速检测。 对于筛查阴性的样品出具： “HIV抗体阴性（—）”报告 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 应采用三级包装系统（WHO提出） NO.1 带螺帽的冻存管，要求防渗漏。 标注：姓名、种类以及采集时间。 NO.2 ：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，带盖子。（金属盒，硬塑料盒） NO.3：生物运输箱。外贴警示标签。 血清和血浆样品应在2?8℃条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18?25℃运送。 实验室需要重视的问题：cutoff值的计算 临界值（cutoff值）是界定样品阴阳性的标准，不同的试剂有不同的设定方法。 以珠海丽珠为例： cutoff值=NC1+0.15。 （阴性对照0.08，按0.08计算） 因此在NC10.08时，cutoff值=0.230. 实验室需要重视的问题：cutoff值的计算 S/CO值的计算： S/CO值=样品OD值/cutoff值 S/CO值≥1为阳性，反之为阴性。 外部质控目的： 为了监控检测的重复性和稳定性， 试剂盒批间或孔间差异。 包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以