基于PCR技术的miRNA定量检测方法.pdf

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2010，30(11)：88-93 基于 PCR技术的miRNA定量检测方法术 陈 新 曾长英 卢 诚 王文泉 (中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海 口 571101) 摘要 microRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物 中，不编码蛋 白质的短序列RNA，它广泛参 与真核生物的生长发育、新陈代谢和应激反应等生命活动。但绝大多数miRNA的生物学功能还 不清楚，通过灵敏的定量检测方法，了解miRNA在不同组织部位的时空表达，是探究其功能的重 要环节。现着重介绍了2类7种基于PCR技术的miRNA定量检测方法的基本原理和实验流程， 并分析 了这些定量检测技术间的异 同和适用范围。 关键词 miRNA 探针 荧光染料 定量PCR 中图分类号 Q75 microRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物 植物从原来的9科 24种增加到 11科 29种，增加的2 中，不编码蛋 白质的短序列RNA，长度为 20～24nt。成 科是大戟科(蓖麻)和芸香科(金钱橘、红橘、甜橙、三叶 熟miRNA的5端为磷酸基团，3端为羟基，它通过与靶 橘)。单子叶植物有水稻、甘蔗、高粱、小麦、玉米，物种 mRNA特异性的碱基互补配对，引起靶mRNA的降解 数虽然没有增加，但miRNA的数量增加了312个 。尽 或者抑制其 翻译，从而实现对靶基 因转录后 的调 管miRNA的数 目得到迅猛增长，但绝大多数miRNA的 控 。miRNAs在控制植物发育、开花时序、新陈代谢 生物学功能研究尚显滞后，而miRNA生物学功能研究 和应激反应等方面起着重要作用 。除此之外，多数 的重要一环是探究miRNA在特定时期、特定组织及特 miRNA还具有高度保守性、时序性和组织特异性 。 定环境的表达特性，进而实现miRNA对 目标基因的调 自miRNA被发现以来，该领域的研究得到迅猛的 控。本文重点介绍miRNA定量检测的常用方法，并从 发展。miRNA的数 目从miRbase数据库~2002年 l2月 原理上剖析了各种方法的异同及优缺点，以便科研人 最初发布Release1．0版本的218个迅速增加到现在的 员根据具体的实验 目的和要求，选择最为恰当且经济 接近 15000个，目前已连续更新发布了29个版本，在 有效的检测方法 ，开展针对 miRNA的研究。 2005年4月和2007年 12月为时间节点可将miRNA的 15000 发展分为3个发展阶段，第一阶段 miRNA数 目增长缓 10000 _ t 慢；第二阶段增长较快；第三阶段则为miRNA的快速增 l2／07 It — 5000 长阶段，且增加相同miRNA数量所需的时间越来越短 O4／05 ·一 … 。 。 。 ¨l。．- ．． 一 # · ·． ’| ． (图 1)。2010 年 4 月