基因工程B.doc

《基因工程》复习要点 DNA：存在于生物体内的DNA，包括染色体DNA、质粒DNA、病毒(噬菌体)DNA、线粒体和叶绿体DNA。其中绝大部分是双链DNA，部分病毒和极少数质粒是单链DNA模仿细胞内发生的DNA复制过程进行的，在体外由酶催化合成特异性DNA片段的反应。限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)：能专一性的识别双链DNA上的特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的一类内切核酸酶。 同尾酶(isocaudamer):切割DNA分子所得的DNA片段具有相同的粘性末端的限制性内切核酸酶。 同裂酶(isoschizomer):来源不同，但具有相同的识别序列的限制性内切核酸酶。 限制性图谱(restriction map):DNA分子(片段)上的限制性内切核酸酶的识别序列的分布图称为~Star活性：某些限制酶在特定条件下，可以在不是原来的识别序列处切割DNA的现象。 DNA连接酶(DNA ligase):催化DNA链的相邻3’-羟基和5’-磷酸基团发生缩合反应，形成磷酸二酯键的酶。克隆载体：一种具有携带外源DNA片段或基因进入受体细胞，并使其在受体细胞中得以维持或表达的功能的DNA分子。 质粒(plasmid)是存在于细胞内染色体之外的外链DNA分子，一个质粒就是一个DNA分子质粒表达载体：在质粒载体的基础上增加了表达元件构建而成的，在受体细胞内能稳定维持并表达外源目的基因的克隆载体。人工染色体载体：是含有质粒载体所必备的第一受体源质粒复制起始位点(ori)和第二受体染色体DNA着丝点、端粒及复制起始位点序列，且含有合适的选择标记基因的一种“穿梭”基因载体。 基因组文库：贮存了某种生物基因组的DNA序列的一个受体菌群体。 cDNA基因文库：某种生物材料的基因转录产物mRNA经逆转录形成不同的cDNA片段，与克隆载体重组后贮存在受体菌群中，这样的群体就是cDNA基因文库。 反向PCR(inverse PCR):利用两个靶序列引物对未知片段进行常规扩增的PCR技术。 长程PCR(LA PCR):一种超长DNA片段的PCR扩增方法。 Alu PCR：根据Alu序列的高度保守区域设计引物，扩增Alu重复序列间的未知区域的PCR方法。 受体细胞(receptor cell):又称宿主细胞或寄主细胞，从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。 人体胚胎干细胞(ESC)是一种高度未分化细胞，是受精卵分裂发育成囊胚时内细胞团的细胞，它具有体外培养无限增值、自我更新和多向化的特性，几乎能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。 转化(transformation)：是指重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持与表达的过程。 转导(transduction)是指通过λ噬菌体颗粒感染宿主细胞将外源DNA分子导入到受体细胞内并稳定遗传的过程。 转染(transfection)是采用与质粒DNA转化受体细胞相似的方法，将重组λ噬菌体DNA分子直接导入受体细胞中的过程。 分子探针(molecular probe)具有同特异性目标分子产生很强的相互作用并可对其相互作用的产物进行有效检测的DNA分子、RNA分子和蛋白质分子。 克隆子的筛选：经过各种方法将外源DNA分子导入受体细胞后，获得所需阳性克隆子的过程。 基因沉默(gene silencing)：(P261) 基因组(genome)指单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组 生物芯片（biochip）采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子，如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序的固化于支持物的表面，组成的密集二维分子排列。 基因芯片（genechip）采用原位合成或显微印刷技术，将数以万计的DNA探针分子固定于支持物的表面上，产生的二维DNA探针列阵。???绪论??? 基因工程理论基础：①不同的基因具有相同的物质基础②基因是可切割的③基因是可以转移的④多肽与基因之间存在对应关系⑤遗传密码是通用的⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代 基因工程技术基础：①限制性内切核酸酶②DNA连接酶③基因克隆载体④基因转移技术 基因工程的技术路线：（P4） 应用研究：①基因工程药物研究②转基因植物研究③转基因动物研究④其他：酶制剂、食品、化学与能源核酸的制备 ⑴双链DNA是靠互补配对的碱基之间的氢键维持的 ⑵天然DNA分子有的以线形存在，有的以环状存在： 几乎所有真核生物和部分原核生物染色体DNA以线形存在； 大部分原核生物染色体、线粒体、叶绿体以及细菌的质粒都是环状DNA分子； 病毒和噬菌体中有的含线形DNA，有的含环状DNA。 ①冷