抗体药物偶联物综合分析的一体化工作流程.PDF

抗体药物偶联物综合分析的 一体化工作流程 采用微流控 HPLC-Chip/MS 技术 应用简报 作者 摘要 、 和 本研究使用安捷伦 解决方案和飞行时间 质谱仪开发出一套测定抗体药 Chu Gregory Staples Ning Tang HPLC-Chip (TOF) 安捷伦科技公司 物偶联物完整质量数、去糖基化完整质量数、药物 抗体比率以及多糖组成的高度自动化 / Santa Clara, CA 的集成分析方法。 USA Andy Gieschen 安捷伦科技公司 La Jolla, CA USA M. Sundaram Palaniswamy 安捷伦科技公司 Bangalore, India 前言 本应用简报介绍了一种采用安捷伦 HPLC- 实验部分 Chip 解决方案和飞行时间 (TOF) 质谱仪测定 抗体药物偶联物 (ADC) 属于新一代靶向生 仪器 赖氨酸连接 ADC 完整质量数、DAR 和多糖 物药物，合成方法是将细胞毒素剂通过连接 组成的新型快速一体化工作流程。分析完整 本工作流程采用配置 HPLC-Chip Cube 的 物连接至靶向特定细胞的单克隆抗体 (mAb) 。 ADC 时，采用标准蛋白质鉴定芯片与反向色 Agilent 1260 毛细管与纳流液相色谱以及 偶联化学方法有包括半胱氨酸连接、赖氨酸 谱柱对不同种类糖基化和药物偶联物质进行 Agilent 6230 精确质量数 TOF LC/MS 进行 连接和位点特异性偶联在内的多种类型， 需 分离。采用 mAb-ProtID 芯片（配备含固定 开发，并采用不同微流控芯片进行 ADC 的 要根据偶联化学类型选择不同的表征方法。 化 PNGase F 酶的在线反应器）以及反相富 表征。进行标准完整 ADC 分析时采用的是 ADC 具有高效、高选择性和低毒性的特点， 集与分析色谱柱测定去糖基化质量数与 ADC 反相芯片。进行完整去糖基化 ADC 分析与 其生产与表征比传统 mAb 更为复杂。需 DAR。具有相同去糖基化反应器的另一种芯 DAR 计算时，使用的是 mAb-ProtID 芯片 （配备含固定化 的酶反应器）以及 要采用严格质量控制以确保 ADC 具有恒定 片以及多孔石墨化碳富集与分析色谱柱可用 PNGase F 的多糖组成和药物/抗体比率 (DAR) 。取 于表征所释放的多糖。该系统可分析纳克级 PLRP-S 300Å, 5 µm 色谱柱。表征完整 ADC 所释放的 糖链时，使用的是具有固定化 得适合的 DAR 对于 ADC 效率优化和毒性 的上样量，且所有分析均可在 15 min 内完 N-