柴油降解基因工程菌的构建及降解特性摘要.PDF

微生物学通报 Jun. 20, 2017, 44(6): 1271−1279 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160696 研究报告 柴油降解基因工程菌的构建及降解特性 罗群 何颖 侯登勇 王庆蓉 刘琼 蒋定文 沈先荣* ( 200433) 摘 要：【目的】构建柴油降解基因工程菌，提高柴油降解速率，研究p450 基因在柴油降解过 程中的作用。【方法】将Alcanivorax borkumensis SK2 的p450 基因合成后，连接至烷烃响应表 达载体pCom8 中，构建该基因的表达载体p450-SK2/pCom8 ，并将其转入大肠杆菌DH5α 中， 通过SDS检测该基因在大肠杆菌DH5α 中的表达，并将重组质粒p450-SK2/pCom8 转入 柴油降解菌Acinetobacter sp. Y9 中，构建基因工程菌p450-SK2/Y9 ，研究工程菌p450-SK2/Y9 对柴油的降解特性及 p450 基因在构建的工程菌 p450-SK2/Y9 中的表达。【结果】PCR 、酶切 及测序结果表明重组质粒 p450-SK2/pCom8 构建正确。当柴油诱导浓度大于 1%时，目的基因 在大肠杆菌 DH5α 中的蛋白表达量较大，且随着诱导时间的延长而呈增加趋势。通过PCR 检 测构建的基因工程菌p450-SK2/Y9 中的p450 基因表明，工程菌构建正确，利用单菌株降解柴 油时，宿主菌Y9 与工程菌p450-SK2/Y9 的柴油降解效率未见明显差异，但工程菌p450-SK2/Y9 在构建的菌群中对柴油降解的促进效果明显。SDS结果表明，p450 基因在构建的工程菌 p450-SK2/Y9 中能得到准确表达，在混合菌中的表达量高于单菌株。【结论】柴油降解基因工 程菌在混合菌群中对柴油降解具有促进作用，而在单菌株情况下未见促进作用，且 p450 基因 的蛋白表达在混合菌中也高于单菌株，这对于提高柴油的降解速率及研究p450 基因在柴油降 解过程中的作用机理具有一定意义。 关键词：柴油，降解，基因工程菌，蛋白表达 Construction and characterization of engineered diesel-degrading bacterium LUO Qun HE Ying HOU Deng-Yong WANG Qing-Rong LIU Qiong * JIANG Ding-Wen SHEN Xian-Rong (Naval Medical Research Institute, Shanghai 200433, China) Abstract: [Objective] We constructed engineered bacterium to improve diesel biodegradation and to study the effect of p450 gene on diesel biodegradation. [Methods] The p450 gene of Alcanivorax borkumensis SK2 was constructed in pCom8 and the p450-SK2/pCom8 plasmid was transformed into