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3.2.2 增菌和分离培养(1)增菌: 将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生 长。 (2)分离培养:将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。 (3)菌落特征:金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、 金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固 酶试验。 3.2.3 鉴定 (1)染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m～1m。 (2)血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。  取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌 株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养 18 h～48 h，重复试验。 3.3 溶血性链球菌检验 3.3.1 检验程序 3.3.2 操作步骤 (1)增菌培养 ?? 将样液吸取5 mL，接种于50 mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种子血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃士l℃培养24 h，接种血平板。 （2）形态与染色 血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm～0.75 mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2 mm～4 mm界限分明、无色透明的溶血圈。 为革兰氏阳性球菌。 （3）生化试验 　①链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2 ml，加0.8 mL灭菌生理盐水，混匀，再加入18 h～24 h、36℃士1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25 ml（如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%～0.35%），振荡摇匀，置于36℃士1℃水浴中10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24 h后不溶解即为阴性。 ②杆菌肽敏感试验 　　　挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36℃士1℃培养18 h～24 h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。 3.4 志贺氏菌检验 GBT 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验.pdf （1）增菌??? 吸取检样25mL，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，于36℃培养6~8h。??? 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 （2）分离培养和初步生化试验 ??? 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18~24h。 志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 HE平板照片 发酵乳糖的某种肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖，呈蓝绿色或蓝色,可能就是志贺氏菌 沙门氏菌有黑色中心,如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了 。 SS平板照片 不发酵乳糖 发酵乳糖 麦康凯平板照片 菌落为粉红色，半透明的，可能为志贺氏菌。 EMB平板照片 菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌。 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18~24h，分别观察结果。 ???  2－志贺氏菌　　3－沙门氏菌　　4－大肠杆菌 志贺氏菌TSI斜面仍为红色；底层产酸不产气，变黄色；不产H2S，不出现黑色。 下述培养物可以弃去：??? a.