实验一布氏杆菌病的检疫.ppt

实验一 布氏杆菌病的检疫 实验目的1.初步了解布鲁氏菌病的免疫生物学检疫方法的种类和每种方法的优缺点。2.掌握布氏杆菌病的免疫生物学检疫的具体操作方法和结果的观察、判定。 实验材料 教学录像结合教师演示操作 器材：中试管、玻璃板、微量移液器、 5ml吸管、tip头等。 试剂：布氏杆菌病试管凝集抗原，阳、阴性血清； 布氏杆菌虎红平板板凝集抗原，阳、阴性 血清；新鲜牛血清，0.5%石碳酸生理盐水； 实验原理 布氏杆菌病的血清学检验方法中以凝集试验最为常用，机体感染后1周即产生凝集抗体，一般流产后1-2周达最高，经半年开始下降，可持续2-4年，具体方法可采用试管凝集试验法和虎红平板凝集试验法。 实验方法----试管凝集试验骤 一、操作步骤 试管 稀释液ml 待检血清ml 1:20稀释抗原ml 稀释度 1 2.4 0.1 ---- 1：25 2 ------ 0.5 0.5 1：25 3 0.5 0.5 0.5 1：50 4 0.5 0.5 0.5 1：100 5 0.5 0.5 0.5 1：200 实验方法----试管凝集试验 二、制备比浊管 管号 1：20稀释抗原液ml 稀释液 ml 清亮度 % 标记 1 0.0 1.0 100 ++++ 2 0.25 0.75 75 +++ 3 0.5 0.5 50 ++ 4 0.75 0.25 25 + 5 1.0 0.0 0 - 全部试管充分振荡后，置于37～38℃溫箱中，22～24小时后用比浊管对照检查记录结果，出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价。 试管凝集试验 结果判定： 血清凝集价为1：100以上，为阳性。 血清凝集价为1：50为可疑，可疑反应的家畜经3～4周重检，仍为可疑者判为阳性。 注意事项 试管凝集试验，可出现非特异性反应： I）假阴性 原因: ① 检查时，动物处于潜伏期； ② 幼年畜，细菌在局部淋巴结， 活动受限制，抗体滴度低。 ③ 母畜怀孕后期，母源抗体随血 液循环至乳腺排出。 ④ 布鲁氏菌病慢性，长期刺激， 动物对抗原不敏感，故抗体滴 度不高。 II）假阳性 动物感染巴氏、土抗、弯杆菌、大肠杆菌的某些群等G－菌，与布鲁氏菌有类属抗原，抗体滴度一般在阳性及格，重检，可能下降，再检，最多维持原来水平。 实验方法---虎红平板凝集试验 一、实验步骤 取被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各0.03ml滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支火柴棒混合均匀，在室温（20℃）4～10分钟内记录结果，同时以阴、阳性血清作对照。 实验方法---虎红平板凝集试验 结果判定： 在阳性血清及阴性血清实验结果正确的对照下，被检血清出现任何程度的凝集现象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。 注意事项 混匀时面积不宜过大，应该在直径2cm的范围内进行。 每检一个样品都应更换一个火柴棒，防治出现假阳性。 本方法比较敏感，容易出现假阳性的结果，所以应该配合补体结合实验进行确诊。