实验大肠杆菌的培养和分离.pptVIP

一、基础知识： (一)微生物 大肠杆菌（E.coli） 细菌的代谢类型 菌落的概念 选择培养基 四、无菌操作 比较消毒与灭菌 二 操作步骤 思考题 （二）液体培养基接种培养 （三）平板划线分离法 （四）稀释涂布平板法 稀释涂布法 （五）斜面接种及菌种保存 思考题？ 利用培养基技术不仅可以分离微生物，也可以进行植物组织培养。请简要说明这两项技术应用设计思路的相同点以及区别。 实验一 大肠杆菌的培养和分离 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。 2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？ 划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？ 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一 致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是 符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明 接种过程中，无菌操作还未达到要求。 主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管 操作过程： 先将培养菌液稀释（10-5~10-7倍） 用移液管或吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加 在平板上，用无菌玻璃三角刮刀均匀涂布在培养 基平面上。在适当稀释度下，可培养得到相互分 开的的菌落。 将培养皿倒置（盖在下），放于３７ ℃恒温培养 箱中培养１２～２４小时。 划线分离方法简单；涂布分离，易形成单菌落， 但操作复杂些。 10g土样 从土壤中分离微生物 主要器具： 操作过程：在无菌操作下，用接种环挑取___菌落， 再用划线法（自斜面底部向上轻轻划直线）接种 在_____上， _____℃恒温培养箱中培养____小时 后，____℃ 冰箱保存。 无菌操作：同前 试管斜面培养基密闭效果比平面的好很多,不容易 进入杂菌，同时能用来做纯细菌的长期保存。 思考：菌种保存为何采 用斜面而不是平板？ 接种环、恒温箱、冰箱 单 斜面 ３７ ２４ ４ 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 相同点：都是从培养对象所需的营养条件出发， 配置适宜培养基。都要求严格的无菌条件。 不同点：植物组织培养往往还要加入激素。 例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 D 100ml H2O ⑦ 0.5g CaCl2 ⑥ 0.5g FeSO4 ⑤ 9.25g MgSO4 ④ 4.0g K2HPO4 ③ 0.4g （NH4）2SO4 ② 10g 粉状硫 ① 含量 成分 编号 例2．右表是某微生物培养基成分，请据此回答： （1）右表培养基可培养的微生物类型是 。 （2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基，可再加入 . 自养型微生物 含碳有机物 * * 实验1： 大肠杆菌的培养和分离 微生物包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生生物 特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。 大肠杆菌在人体的_____中一般对人体无害，但任何 大肠杆菌如果进入__________都会对人体产生危害。 大肠杆菌是_______工程中被广泛采用的工具。 肠道 泌尿系统 基因 革兰氏______（填阴或阳）性菌 阴 代谢类型： 异养，兼性厌氧型 生长适宜温度： 质粒、 EcoRⅠ限制酶、 E.coli-DNA连接酶、 受体细胞 37℃左右 自养型细菌 异养型细菌: 光合自养型: 化能自养型: 大部分腐生菌和寄生菌 如蓝细菌 如硝化细菌 1、同化作用类型 2、异化作用类型 需氧