第四章微生物生长与生活环境介绍.ppt

* 四、 微生物培养与生长规律 第一节 微生物纯培养 第二节 微生物纯培养群体生长规律 第一节 微生物纯培养 实验室条件下，由一个微生物细胞繁殖得到的后代。 纯培养基本步骤：　　　　　 稀释平皿法 划线法 单细胞挑取法 纯培养方法 (2) 　 培养 　(1) 　分离 一、微生物纯培养的概念 第一节 微生物纯培养 二、微生物纯培养技术 1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。 基本过程：（1）梯度稀释过程；（2）分离培养过程 涂布 倾注 梯 度 稀 释 过 程 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 2、单细胞挑取法： 从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。 第一节 微生物纯培养 二、微生物纯培养技术 3、平皿划线法 用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。 第一节 微生物纯培养 二、微生物纯培养技术 三、微生物无菌操作与接种技术 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 （1）培养基与接菌工具的灭菌 （2）保证接菌过程的无菌操作 灭菌方法 一、高温灭菌 湿热灭菌 干热灭菌：干燥条件，160℃维持1-2h。 高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压 的同时产生高温。利用高温杀死菌。 巴斯德消毒法：采用60-70℃的温度处理15-30min 的消毒方法。 间歇灭菌法：100℃，30-60min 冷却，37℃培养1d 反复三次 1、紫外线： 杀菌波长范围：240—300nm 杀菌力最强范围： 255—265nm 二、辐 射 紫外线杀菌特点： 穿透力差，用作表面消毒或空气灭菌，30min灭菌95%以上 2、放射性同位素： Co60等，主要用于诱变产生新品种 （一）纯培养的保存 第一节 微生物纯培养 四、纯培养的保存与复壮 保存过程的注意点：防止杂菌污染。 1、传代保存法 2、液体石蜡覆盖保存法 3、载体保存法 4、悬液保存法 5、寄主保存法 6、冷冻保存法 （二）纯培养的衰退与复壮 第一节 微生物纯培养 四、纯培养的保存与复壮 衰退的原因：衰老、变异 衰退的表现：生长缓慢 　　　　　　优良性状的丧失 　　　　　　抗逆性下降 衰退的预防：控制传代频率 　　　　　　创造良好的培养条件 　　　　　　采取有效的保存方式 复　　壮 选　　优 　　　　　汰　　劣 一、微生物生长量的测定 第二节 微生物纯培养群体生长规律 微生物生长量的测定 微生物数量的测定 显微镜直接计数法 平板计数法 比浊法 称重法 含N量测定法 DNA含量测定法 ATP含量测定法 代谢活性法 微生物重量的测定 (一) 微生物数量的测定 1、显微镜直接计数法 使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 一、微生物生长量的测定 第二节 微生物纯培养群体生长规律 2、平板计数法 对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。 优点：传统计数方法。对设备要求不高。 一、微生物生长量的测定 第二节 微生物纯培养群体生长规律 10-3 10-5 10-4 10-6 ３、比浊计数法 根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。 优点：简便，直接。 一、微生物生长量的测定 第二节 微生物纯培养群体生长规律 (二) 微生物重量的测定 1、称重法 用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。　　 优 点：简单可靠。 一、微生物生长量的测定 第二节 微生物纯培养群体生长规律 在活性污泥法中采用的指标： （1）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定） 污泥—干燥----称重(W1) （2）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确） 上述已称重污泥-----马福炉(500度2小时)----冷却---称重(W2) (二) 微生物重量的测定 2、含氮量测定法 根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。 一、微生物生长量的