第五节分离条件的选择介绍.ppt

续前 2．相对校正因子的测定 3．注意事项： 相对校正因子与待测物、基准物和检测器类型有关， 与操作条件（进样量）无关 基准物：TCD→苯；FID→丁庚烷 以氢气和氦气作载气测的校正因子可通用 以氮气作载气测的校正因子与两者差别大 （三）定量方法 1．归一化法 2．外标法 3．内标法 4．内标对比法 1．归一化法 前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰 依据：组分含量与峰面积成正比 优点： 简便，准确 定量结果与进样量、重复性无关（前提→柱子不超载） 色谱条件略有变化对结果几乎无影响 缺点： 所有组分必须在一定时间内都出峰 必须已知所有组分的校正因子 不适合微量组分的测定 2．外标法：以待测组分纯品为对照物，与试样中待测 组分的响应信号相比较进行定量的方法 a．工作曲线法：i纯品→工作曲线，同体积样品与之比较 c 前提：进入检测器样品量与峰面积成正比 b．外标一点法：一种浓度对照物对比样品中待测组分含量 前提：截距为0，对照品浓度与待测组分浓度接近 c．外标两点法： 前提：选 取两点对照品的浓度，需涵盖待测浓度 外标法特点： 1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大 →每次进样量应一致，否则产生误差 图示 back 3．内标法：无待测物纯品，加入样品中不含对照物， 以待测组分和对照物的响应信号对比定量 对内标物要求： a．内标物须为原样品中不含组分 b．内标物与待测物保留时间应接近且R1.5 c．内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质 内标法优点： 进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响 只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关 适合测定微量组分 内标法缺点： 制样要求高；找合适内标物困难；已知校正因子 4．内标对比法（已知浓度样品对照法） 配制等量加入内标物的样品溶液和对照品溶液 内标对比法特点： 不需要校正因子 进样量对结果影响不大 注：对于正常峰，可以h代替A计算含量 示例 例1：内标法测定无水乙醇中微量水分（见书P358） 比较 补充概念 相比：流动相与固定相体积比 练习 见书后P361题11 解： 续前 练习 见书后P362题12 解： 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第五节 分离条件的选择 一、分离度（分辨率）及影响因素 二、实验条件的选择 一、分离度（分辨率）及影响因素 1．分离度定义式 2．影响分离的因素（分离方程，分离度计算式） 1．分离度定义式 分离度：相临两组分间峰顶间距离是峰底宽平均值的几倍 （衡量色谱分离条件优劣的参数） 讨论： 2．影响分离的因素（计算式） 前提——定义式基础上，相邻两组分的n一致（假设） 柱选择项 柱容量项 柱效项 a．柱效项及其影响因素： 影响色谱峰的宽窄 主要取决于色谱柱性能及载气流速 续前 讨论： 增加柱效是提高分离度的一个直接有效手段 提高柱效、改善分离的途径：增加柱长；降低板高 根据速率理论，降低板高、提高柱效的方法是： 1）采用粒度较小、均匀填充的固定相（A项↓ ） 2）分配色谱应控制固定液液膜厚度（C项↓ ） 3）适宜的操作条件： 流动相的性质和流速，柱温等等（B项↓ ） 选用分子量较大、线速度较小的载气——N2气， 控制较低的柱温 b．柱选择项及其影响因素： 影响峰的间距 主要受固定相性质，以及柱温影响 续前 讨论： 增大柱选择性是改善分离度的最有力手段 气相色谱中，柱选择性取决于固定相性质和柱温 选择合适的固定相使与不同组分的作用产生差别 才能实现分离 一般说，降低柱温可以增大柱的选择性 c．柱容量项及其影响因素： 影响峰位 主要受固定相用量、柱温和载气流速的影响 续前 讨论： 综合考虑分离度、分离时间和峰检测几项因素 控制k的最佳范围 2~5 GC中，增加固定液用量和降低柱温可以增加 k 图示 k 影响峰位 n 影响峰宽窄 α影响两峰间距 练习 如何根据具体情况改进分离度？ α太小，两组分未分开 应改变固定相极性，降低柱温 k 太小，n 也太小， 应增大固定液用量，降低柱温 n 太小，