固相萃取反相高效液相色谱荧光检测法测定拟南芥中的生长素.pdfVIP

第37 巷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报 第9 期 2ω9 年9 月 Chínese Journal of Analytical Chemístry 1324 -1327 μ 5 ♂ … M J … 回相萃取反相高效液相色i普荧光检测法 测定拟南芥中的生长素 符继红1 ， 2 祷金芳2 王吉德1 问存玉 *2 1 (新疆大学化学化工学院，乌鲁*齐的ω46) 2( 中同科学院遗传与发育生物学研究所网家植物基因研究中心(::f t京) ，北京 1 ∞101 ) 摘 襄建TL了回相承取反相高效液相色i替荧光检测法测定拟商芥中生长素的方法。采用Waters sunfire C18 (150 mm x4. 6mm， 5μm) 色i曾柱，以乙脯唰10 mmoVL 乙酸铀(20:80 ， V/V， 乙酸调节~ pH 3.5) 为流动相，在流 速 1 mL/mín ，进样量20μL，性温20 吃，样品温度 10 C，荧光激发和发射波长分别为275 和345 nm 条件 f ，分 离测定 f拟南芥中的植物生长素时|牒乙雕和11 睐同酸含量。分离效果良好，结性抱回分别为 85.71 pg- 2 1. 43 ng 和0.33 ng- 1. 29闸，相关系数分别为0.9992 和0.9999 ，相对标准偏差小子5% ，平均回收率分别为 103.8% 和 102.6% 。本方法口J对少量模式植物样品进行灵敏、准确的定量分析。 关键词 回相1存取，生长素，叼Ir嗷乙酸，Ø~I 赚两酸，拟南芥，高效液相色i曾 1 引富 植物橄素是在植物体内某一部位合成，并可转移到其它部位，调节植物生长发育具有显著的微量有 机物。植物激素在楠物生长发育过程中发挥着荒要作用[llo 楠物功能揍网对植物生长发育起到的精 细调控作用通常以植物激蜜的形式体现出来，植物撒素含量的微小变化就能够11 起植物明显的生理变 化，对其进行掘取和测定非常困难。生长素是最早发现的一种植物撒素，主费功能是促进楠物生辰、细 胞分裂和分化[2] 。由于其在植物体内含量提嫩，所以从少最样品中分离恻古生长索具有荒要的意义o 近年来，检测植物撒索主耍采用吨相包i岳质i持联用(GιMS) 和掖相色谱质谐联用(LC-MS) 技术。 但是 GC-MS 方法要求样品的衍生化以提向挥发性和灵敏度，样品处理过程复杂费时。 LC-MS/MS 技术 虽然有较局的灵敏度和边拌性.1叫1v.索内标物的使用使Jt定量更为准确[3J10 但由于仪器和内标物的 昂贵，限制了改方法的广泛应用。高效被相色i普( HPLC) 是一种通用的分析仪器，其在植物撒素测定研究 中已有报道.1f!困生物体内激素的复杂性句特殊性，使具有效成分的提取分离成为极为关键的一步。 HPLC 法测定多种楠物内源激素时经常发生分离菇、晦咽不良及严重拖培现象[81 ，且样品用撞一般要求较 多，10] ，对一些特殊样品无法实现测试要求。因此，选择合适的椭物激素提取方法和1 色懵条件尤为重重要。 本研究建立的问相萃取高效液相色谱(HPLC) 荧光检测法可以准确涮定植物中的生长素类物质， 样品用最少，可以满足普通分析实验笼完成相关测试的要求。拟南芥(Arabidopsís thaliα阳)属被子植 物，双子叶分纲，属十字花科。因其具有生命周期短、自花授粉、核息网组小，结构简单等优点，是植物细 胞遗传学研究的经典模式材料[1110 建立拟南芥中植物激素生长素含量的测定方法对有关生长素作用 机制l 及信号转导途径的研究具有撞要意义。 2 实验部分 2.1 仪器与忧荆 2695 高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) .配备 Waters Empower 化学工作站、Waters 2475 荧光检测 2(附9{)2{)2 收稿;2∞9.{)S幡11 接受 本文系国家自然科学基金(No.90817∞8) 资助项