在线微柱富集纳升液相色谱-串联质谱法测定大鼠脑组织中类固醇激素.pdfVIP

第4 期 分析化学(阳N羽田A丑厄) 研究报告 第41 卷 2013 年4 月 Chinese Joumal of Analytica1 Chemistry 5 17 -522 [M)I : 10.3724/SP. J.I096. 2013.~归。 在线微柱富集纳升液相色谱·串联质谱法 测定大鼠脑组织中类固醇激素 石先哲1 蔡斌2 黄思腾3 单圆鸿1 张婷婷2 路鑫1 许国旺· 1 ,(中国科学院大连化学物理研究所，中国科学院分离分析化学重点实验室，大连 11ω23) 2 (赛默飞世尔科技中国有限公司，上海 201 203) 3( 天津大学化工学院，天津3∞192) 摘 要 类固蹲激素对脑功能的调节越来越受到人们的关注，但其在脑组织中极其微量而且脑组织样品量 相对少，这对检测方法提出了更高的挑战。本研究优化了脑组织中提取类固自事激素的预处理方法，发现乙撑 的提取效果最好。经过固相萃取桂进一步纯化的样品，基质干扰明显减少。采用75μm 内径的C8 捕集柱和 分析柱，通过阀切换连接，构建了在线微柱富集纳升液相色谱分析系统，结合纳喷离子源串联质谱法实现高灵 敏检测脑组织中类固醇激素。系统考察了方法的精密度、定量曲线、回收率等分析特性。日内和日间精密度 分别在45% -12怠%和83% -203%之间。 除了孕嗣略有离子抑制外，其它激素基质效应不明显，而且低、中、 高3 个浓度下的回收率基本都在ω% - 1 15%之间。不同类固醇激素的检出限差异较大，在0.02 -10μgIL之 间。与常规尺寸液相色谱·质谱系统相比，相同进样量下，该方法的灵敏度显著提高了57 町 714 倍，同时流动 相消能量降低了几百倍。将本方法用于大鼠脑组织中类固醇激素的检测，检测到4 种类固醇激素，分别为辈 嗣(Tes伽阳one)O.47 ng!g，肾上腺嗣( Corticos阳。ne)26.2 nglg ，醒国嗣(Aldos惯。ne)0.49 nglg 和皮质酶(Hy­ drωrtisone)O.06 ng!g。本方法具有灵敏度高、样品需要量少和溶剂消挺少等优势，可用于生物组织样品中类 固醇激素的测定。 关键词 纳升液相色谱;串联质谱;类固醇激素;脑组织 1 引言 类固醇激素(Steroid honnone) 是一类具有环戊烧多氢菲母核的四环脂肪娃化合物。它对于人体的 生长发育、调节性功能、免疫调节及各种生理代谢功能具有非常重要的作用，其中对脑功能的调节越来 越受到人们的关注，如在学习和记忆、突触的传递功能、神经保护、神经退行性病变、情绪、应激以及月经 相关疾病中起着非常重要的作用[IJ 。 目前，类固醇激素的检测方法主要有酶联免疫法、气相色谱·质谱法(GC-MS) 和液相色谱·串联质 谱法(LC-MS/MS) 等。其中，酶联免疫法灵敏度较高、简便快速，但存在交叉反应及假阳性问题[2] 。 GC­ MS 分析前样品需要经过复杂的衍生化步骤后才能测定，导致前处理过程比较复杂[3] 0 LC-MS/MS 检测 时无需进行衍生化，操作简单。 LC-MS/MS 已经用于血液川、尿液(5) 、组织[6] 、食品[7， 8] 等样品中类困醇 激素的检测。由于类固醇激素在脑组织中的含量极其微量且脑组织样品量相对少，对检测方法提出了 更高的要求。与常规液相色谱相比，纳升液相色谱(Nano LC) 具有样品量少、溶剂消耗少、灵敏度高等 优势，而且通过纳喷离子源(Nano ESI) 与质谱联用时，离子化效率高，可极大提高检测灵敏度例。 Nano LC-MS 已经用于蛋白组学[10，川、细胞代谢物分析[比13 J 等，但 Nano LC-MS 用于脑组织中类固醇激素检测 的报道较少{ 叫。 本研究优化了从脑组织中提取类固醇激素的预处理方法。通过十通阀连接内径75μm、装填粒径 2