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第 40 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第 2 期 Chinese Joumal of Analytical Chemis住y 224-229 2012 年 2 月 001: 10. 3724/SP. J. 1096. 2012. 10953 基于 CdSe-CdTe 量子点能量转移荧光猝灭法测定前列腺抗原 陶慧林黎舒怀 李建平事 (桂林理工大学化学与生物工程学院，桂林 541ω4) 摘 要 研究了 CdSe-CdTe 量子点间发生的荧光共振能量转移，并用于荧光猝灭法测定超痕量前列腺抗原 (PSA) 。在 pH 8.0 的 Tris- HCI 缓冲溶液中，CdSe-CdTe 间发生有效能量转移，使 CdTe 荧光大大增强。 PSA 抗 原与 CdTe 标记的 PSA 抗体发生特异性反应，便能量转移体系的 CdTe 上的荧光强度降低，即发生猝灭。建立 了 CdSe-CdTe 能量转移荧光猝灭法测定 PSA 抗原的方法。在优化的实验条件下，PSA 抗原的线性范围为 2μ 0.28-10μgIL，相关系数 r=0.9992， 检出限达1.5X 10- gIL(n=I l). 关键词 量子点F 共振能量转移z 荧光猝灭法g 前列腺抗原; CdSe; CdTe 1 51 荧光共振能量转移[1] (Fluorescence resonance ene电y transfer , FRET) 是指在两个不同的荧光基团中， 若一个荧光基团(供体 Donor) 的发射光谱与另一个基因(受体 Acceptor) 的吸收光谱有一定的重叠，两个 荧光基团间的距离合适时(一般小于 10 nm) ，即可观察到荧光能量由供体向受体转移的现象。 量子点(Quantumdots , QDs) 是直径约为 2~20 nm，能够接受激发光产生荧光的半导体纳米颗粒。 传统的 FRET 研究主要集中于有机荧光分子类，作为一种新型 FRET 试剂，QDs 具有许多有机荧光分子 不具备的优点，如有可调谐的激发波，抗漂白性，同时连接多个染料分子、狭窄的激发波长和远离激发 峰激发等优良的光学性质。因此，QDs 可以成为比有机荧光分子更好的 FRET 的供体或受体凶。近年 来，QDs 作为供体的 FRET 已被广泛报道[3-9] 。研究表明，量子点也可以作为 F阻T 受体[10， 1 日，为同时使 用不同量子点作为 FRET 供体和受体，建立新型的 FRET 提供了理论依据。目前，这方面的研究尚处于 起始阶段，相关报道较少[比13] 。 荧光能量转移体系发光强度大，灵敏度高，方法简单。本研究将 CdSe-CdTe 能量转移体系应用于 PSA 测定。详细研究了其能量转移规律，计算了荧光共振能量转移相关参数，建立了 CdSe-CdTe 能量转 移荧光猝灭法测定超痕量 PSA 抗原的灵敏方法。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 盯-5301PC 荧光光度计(日本岛津公司);TU-I901 双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器 有限公司) ;FAI∞4 型电子分析天平(上海市天平仪器厂); pHS-3C 精密 pH 计(上海雷磁仪器厂}。 人前列腺游离 PSA 抗原，鼠抗人前列腺 PSA 单克隆抗体(桂林英美特生物技术有限公司) ;CdClz , 琉基乙酸、暗粉、NaBH.、 1- 乙基-3 (二甲基氨基丙基〉碳酷二亚胶(EDC) ， N-是基唬泊酷亚胶(NHS) 、 NaOH 等试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馆水。 2.2 实验方法 2.2.1 水溶性量子点的合成 ( I) CdSe 水溶性量子点的制备 参考文献[14]并做适当修改，在三口烧 瓶中加入 3 mL蒸铺水，通氯气 2~3 min 除氧。然后分别加入 0.04 g Se 粉，0.12 g NaB凡，停止通氨，塞 住瓶口，置于冰浴中反应 2 b，得到无色的澄清溶液 NaHSe. 在氯气保护下，在 1 ∞mL O.ω25 mo l