基于铜增强纳米金标记物结合磁分离的溶出伏安免疫分析法用于蛋白质的高灵敏测定.pdfVIP

Vol. 30 高等学校化学学报 No.5 2侧是p5 月 CHEMJCAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSmES 886ω890 基于铜增强纳米金标记物结合磁分离的 溶出伏安免疫分析法用于 蛋白质的高灵敏测定 沈广宇，冯辉，郝爱平 (糊南文理学院化学化工学院，常德 415栅) 摘要 应用铜原位化学放大纳米金颗粒的倍号增强特性，并结合磁分离技术，提出了一种高灵敏的溶出伏 安免疫分析方法.实验中以人 IgG为模式蛋白质，将抗体修饰的 Si0 @ Fe 0 核壳现磁性纳米颗板和纳米金 2 3 4 标抗体悬浊液?昆合，用以均相免疫识别人 IgG，借助外加磁场分离纯化，在免疫复合物悬浊液中加入铜增强 试剂进行沉积放大反册，再将铜用稀硝酸府解并进行溶出伏安分析检测.结果表明，与基于回相反庶的金属 免疫分析法相比，所提出的藩子均相反应和磁分离原理的方法具有操作简单、分析时间短等优点，该方法显 示出明显增强的人 IgG 检测性能，其线性检测他围为0.1 叫 lα)() ng/mL，检出限为 73 pg/mL.此外，将其用 于实附样品的回收率测定，结果令人满意. 关键词 纳米余;例增强信号放大;磁分离;金属免疫分析 中阁分类号 0657 文献标识码 A 文章编号 0251 -0790 (2∞9 )05-0886-05 蛋白质的高灵敏检测在医学诊断、免疫学、新药开发和蛋白质组学等领域具有非常言重要的意 义[1 斗)一般而亩，基于抗肋抗体之间特异性识别的免疫分析是通过检测标记物的特异活性来定量 12 的.盖在于纳米金机记物的金属免疲分析法具有特异性好、英敏皮肉(1 0- moVL) 哗特点，已被成功用 于各种生物分子的生化分析研究中[4-6J 此外，该方法的英敏度可通过银、金或铜增强特性进一步提 高 l 町 3 个数量级( 10 - 12 _ 10 -15 moVL) [7 - 13) .与银或金增强方法相比，铜增强纳米金标记物的榕出伏 安免疫分析法具有在保证商灵敏度的同时受环境影响较小以及可避免危险试剂的使用等诸多优势L 13J m巳报道的该费方法大多基于回相界田反应模式，存在分析时间长、抗黯U抗体结合她率低等触，点 近年来，磁性颗粒或微球作为分离和国定生化物质的理想耕体已成为一个新的研究热点 j赢过物 理或化学表耐处理方法对磁性颗粒进行者而功能化，用以固定识别生物分子(例如抗体) ，借助磁场作 用可方便地进行物质的分离/富集以及生化分析[14-16) 本文采用均相反应模式代替国相界面反应模 式，引人础分离技术，开发了一种简单、快跑、高灵敏的榕出伏安分析新技术.以人IgG 抗原为模式蛋 白质，优化了包括均相免艘反应梅、液 pH 僚、均相免疫反应时间及制增强反应时间等实验条件.同时 着墩比较了采用均相反应模式并结合辙分离技术和传统的回相界面反应模式时铜增强金属免戒分析法 的电流响应特征以及对人 IgG 的检测性能.此外，通过对实际样品中 hIgG I国收率的测定，考察了金属 免疫分析法的实用性. 1 实验部分 1.1 试荆与仪器 旦在抗人 IgG 抗体( anti占IgG) 、人 IgG 抗原(hIgG) 、人血清白蛋白(HSA) 和牛血清蛋白(BSA) 均购 自鼎罔生物技术有限责任公司(北京).纳米金胶(粒径 20 -30 nm) 按照文献[ 17