基于长春西汀酸的荧光偏振免疫方法测定磺胺二甲氧基嘧啶.pdfVIP

第 38 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第 10 期 2010 年 10 月 Chinese Joumal of Analytical CheßÚslry 1457 -1461 DOI: 10. 3724/SP. J.IO%. 2010. 01457 基于长春西汀酸的荧光偏振免疫方法测定磺股二甲氧基畸睫 王小勇1 龚福春*1 ， 3 唐连飞2 李治章I 郑兴良3 湛雪辉3 1 (湖南科技学院化学与生物系，永州 4251∞) 2 (湖南省出入境检验检疫局，长沙 41仪阳) 3( 长沙理工大学化学与生物工程学院，长沙41α)()4) 摘 要合成了荧光标记物长春西汀酸和示踪物磺胶二甲氧基略睫-长春胶酸，并采用薄层色谱法对示踪物 进行提纯。以磺胶二甲氧基嗜睫为分析对象，利用示踪物与磺胶二甲氧基嗜院抗体的特异性反应，采用荧光 偏振免疫分析方法(FPIA) 研究了荧光标记物的荧光光谱特性。此荧光标记物在 357 nm 的激发光下，于 453 nm 处产生一个荧光发射峰;以荧光素为对照，考察了本方法的灵敏性。结果显示，荧光素的检出限仅为 2.7 附/L，而本方法的检测范围为0.5 -146μglL，检出限达到UO.5μg1L。本方法的 RSD 为3.0% ，重现性好; 其它磺胶类药物对磺胶二甲氧基嗜睫的测定不产生明显干扰。运用本方法检测了饲料中磺胶二甲氧基嗜瞧， 结果与 HPLC 法相吻合。 关键词 荧光偏振免疫分析;荧光标记物;长春西、汀酸;磺胶二甲氧基略晓 1 号l 言 免疫分析技术是建立在抗原·抗体特异性反应基础上的生物化学分析方法。该方法利用了抗原抗 体反应特异性高和亲和性好的特点，可以达到从极其复杂组分中特异性识别待测物并灵敏检测之目的。 酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked immunoω也ent 倒町，EUSA)具有高灵敏度、高效率和低成本的优势，因 而获得了广泛应用[1-5] 。但是，EUSA 作为一种非均相免疫检测方法，它涉及多步反应、分离和洗襟步 骤，操作繁琐[6] 。因此，建立高灵敏、简便和快速的均相免疫分析方法已成为免疫检测的发展趋势。 荧光偏振免疫分析(Fluorescence polarization i町ununoassay ， FPIA) 是一种均相免疫检测方法，与其它 非均相免疫方法相比，具有简便、快速、易于自动化、样品用量少、精密度高、准确等优点[7] 。因此，FPIA 法在药物、激素和毒素等小分子半抗原的检测中展示了良好的应用前景[7-11] 0 FPIA 法通过检测荧光标 记抗原(示踪物)在结合特异性抗体前后的荧光偏振强度(Fluorescence polarization ,FP )变化，测定待测 半抗原[12] 。 荧光示踪剂是 FPIA 法的关键试剂。由于荧光素及其衍生物具有消光系数高、激发/发射波长均在 可见光区、在水中的荧光量子产率高、无毒、易与识别分子交联、成本低等优点，常作为荧光标记物用于 标记抗体/抗原，或用于 FPIA 法中标记半抗原制备示踪剂。但是，荧光素及其衍生物存在一些不足: Stoke 位移小，样品背景对荧光的干扰较大[叫:荧光量子产率对pH 值敏感，且在生物体内的生理环境下 荧光量子产率降低iMj; 具有对光敏感的酣经基，在强光检测下容易分解问];亲脂性差，不宜渗人细胞， 因而用于细胞的研究效果差;特异选择性差。 长春股是一种治疗老人痴呆症生物碱类药物，具有平面刚性结构，是一个较好的荧光发射体。长春 胶为天然产物，对人体无毒副作用，还具有荧光量子产率高，在溶液中稳定等性质[叫。本研究以长春股 为原料，经过简单反应合成了具有一COOH 活性基团的长春西汀酸(AVA ，结构见图 1) ，使之易于与 其它化合物交联;以磺牍二甲氧基嘈睫为分析模型，利用新荧光剂作标记物制备了示踪物，并建立了磺 胶二甲氧基嘻睫(Sulfadimethoxine , SMX) 荧光偏振免疫分析方法。对新型荧光标记物的荧光光谱特性 和示踪物免疫反应性能进行了研究;通过与基于荧光素标记物的 FPIA 法比较，基于新荧光标记物的荧 光偏振免疫分析方法灵敏度提高。 201O.{)1-20 收稿