多基因启动子甲基化参与的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性探究.pdfVIP

安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2014 Dec;49( 12) • 1717 • 多基因启动于甲基化参与的乳腺癌Mα-7 对他莫昔芬敏感性探究 郑璐，汤铜，钱波，李佳 摘要 目的探讨多基因启动子甲基化参与的乳腺癌 MCF- 的深入，其在肿瘤耐受中的作用日益受到关注。 7 对他莫昔芬敏感性的关系。方法 用 Mπ、法对比乳腺癌 DNA 甲基化是一种重要的表现遗传修饰，在调节基 MCF-7 细胞株与耐药株生长增殖差异;流式细胞检测亲本与 因表达和维持基因组稳定性中扮演着重要角 耐药株细胞凋亡之间的差异;RT-PCR 及 Real-Time PCR 对 色[1 -2] 。为寻找可预测乳腺癌内分泌治疗敏感性的 比两细胞株相关基因 mRNA 表达差异;甲基化特异性 PCR 相关基因及其启动子甲基化状态的标志物，该研究 ( MSP) 检测 4 个候选基因(DAPK、 MGMT、 P53 、 RASSFIA) 在 亲本及耐药株中的甲基化状态。结果 Real-Time PCR 可见 分别对 MCF-7 亲本及耐药株乳腺癌细胞株进行相 关基因 mRNA 水平的分析，并通过甲基化特异性 MCF-7/TAM 细胞中抑癌基因 DAPK、 RASSFIA 水平低于亲 本株(P 0. 05); 而 MGMT、 P53 、 DNMTl、 DNM3B 的 mRNA PCR (methlation specific PCR , MSP) 法检测了4 个候 选基因(DAPK、 MGMT、 P53 、 RASSFIA) 在这些细胞 表达水平却较亲本细胞株升高(P 0.05);基因 DNMT3A 的 mRNA 表达水平较低，在亲本及耐药株中均未检出。 MSP 显 株中的甲基化状态。 示，在 MCF-7 细胞中，DAPK、自3 呈非甲基化状态，而对他莫 1 材料与方法 苦芬细胞株这2 个基因为甲基化状态。结合 Real-Time PCR 检测结果，基因甲基化状态与甲基转移酶( DNMTl、 1. 1 实验材料乳腺癌细胞株MCF-7 及他莫昔芬 DNMT3B) 表达呈正相关性;除 P53 基因外，基因 mRNA 表达 成功诱导的耐药株 MCF-7/TAM 均由中国科技大学 水平与甲基化状态呈负相关性。结论 相关基因表达差异 生命科学院乳腺癌研究中心提供。他莫昔芬购自日 及启动子的甲基化状态可能与乳腺癌细胞株对他莫昔芬敏 本 Sigma 公司; Annexin V -FITC Apoptosis Detection 感性相关，为下一步进行临床评估和机制探讨提供了依据。 关键词 MCF-7; DNA 甲基化;化疗耐受;抑癌基因 Kit 凋亡检测试剂盒购自美国 Beckman 公司;RNA 、 中图分类号 R 737.9 DNA 提取、Real-Time PCR、 EpiTect MSP Master Mix 文献标志码 A 文章编号 l ∞0-1492(2014) 12 -1717 -05 试剂盒提剂盒购自德国 QIAGEN 公司;逆转录试剂