大鼠血浆中痕量氨基酸的柱前衍生-高效液相色谱串联质谱测定.pdfVIP

第35 ;ij; 分析化学 (FENX[ HUAXUE ) 研究报告 第7 期 Chine回 Joumal of Analytícal Chenústry 938 - 944 2∞7 年7 月 大鼠血浆中痕量氨基酸的 柱前衍生-高效液相色谱串联质谱测定 赵先恩1 ，4 尤进茂1 ，2 刘洪珍3 索有瑞. 1 1( 中困科学院西北高原生物研究所，西宁 81侃用1) 2 (曲阜师施大学化学科学学院.幽阜273165) 3( 曲阜师范大学体育学院，曲阜273 [65) 气中国科学院研究生院，北京 I(削39) 摘 要 以 [ ，2-量在并-3 ， 4-二氢咔噬矶乙基氯甲酸黯( BCEOC) 作为往前荧光衍生试剂，在 Hypersil ßOS C (4.6 nun x200 mm , 5 抖的反相色谐柱上，荧光检测波长为390 nm( 激发波长为333 nm) ，采用梯度洗脱实现 了 20 种氨基酸标准品衍生物的分离检测。 20 种组分的线性范朋为51. 6 fmol -105. 6 pll1()l ，线性回归系数均 大于0.9995 ; 检出限为6. 3 - [77. 6 fmol (S/N=3: 1) 。经往后串联质谱电喷雾电街i鼠(ESI Source) 实现了各 组分的质i曾鉴定，并以酶氨般(Tyr)衍生物为例进行了fïlH普裂孵饥理解析。 对A、B、C 三组(A: 安静~;t照组; B: 运动力竭即刻组; C: 力竭恢复12 h 组)24 只大鼠血浆中氨基酸的定:i:ìJl1定结果表明，运动力竭即刻较安 静状态大鼠血浆氨基酸含量明显增加;力揭恢复12 h 后血浆氨基酸水平基本恢复重IJ运动前状态。方法的灵 敏度高、â现性好，为大鼠血浆中氨基酸的测定提供了一种新方法。 关键词 大鼠血浆，氨基酸，往前衍生，高效液相色谱串联质谐，荧光俭测 1 号|言 氨基酸不仅是人类和动植物必需的营养来源，而且是调节机体生理活动的重要物质。近年来的研 究表明，兴奋性与抑制性氨基酸递质在运动生理学川和脑缺血的病理生理过程[2j ~þ具有重要作用;人 体内氨基酸的含量变化与多种疾病有密切关系，血清中支链氨基般与芳香氨基酸之比( BCAAlAAA) 已 被广泛应用于肝病氨基酸代谢异常的判断[川。因此，氨基酸的痕量测定对运动生理学、临床医学、神 经生理学、食品科学、疾病诊断及控制等具有重要意义。 多数氨基般在紫外·可见光区没有吸收或吸收很弱，光度法难以准确测定。近年来，往前衍生液相 色谱荧光检测法得到广泛应用。主要的柱前衍生试剂有邻苯二甲隆(OPA){~ ，61 、氯甲酸药即黯(FMOC­ J C1 ) 川、6-氨喽琳基-N-破础Itt亚胶碳殷酶(AQC) ! 8 ( PITC)!9J 等，但 OPA 不与二级胶反 及异硫氨酸苯酣 应且重现性和衍生物的稳定性较差，FMOC-Cl 虽然已被广泛应用，但衍生后需经萃取消除过量试剂的 干扰，操作繁琐且易造成疏水衍生物的丢失，AQC 在水中的荧光量子效率很低，不利于梯度恍脱。 P盯C 衍生反应速度快，产物单一、稳定， 但只能用紫外检测，检出限大约 1 pmo1 ，灵敏度不够高[ 10l o 前期工作 已经用 1 ，2-苯并-3 ，4-二氧咔噬-9-乙基氯甲酸醋(BCEOC)作为柱前衍生化试剂成功地分析了牛血清白 蛋白、瓜子、苔辞中的氨基酸[ 11 . 1月 ，本实验采用 BCEOC 作为衍生试剂测定了3 种状态下(安静、运动力 竭即刻、力渴恢复 12 h )大鼠血浆中的氨基酸，从兴奋性与抑制性氨基酸神经递质及支链与芳香氨基酸 的角度分析了运动对大鼠血浆中氨基酸的影响。结果显示，该法灵敏度高，重现性好，为血浆中氨基酸 的分析检测提供了一种新手段。 2 实验部分 2 . 1 仪器与试剂 11∞型高效液相色谱，质i普联用仪(Agilent 公司) ，配备四元梯度泵、在