应用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小.pdfVIP

φ@忌爹{矗 d且 2013， 29(25):130-135 Chinese Agricultural Science Bulletin 应用流式细胞术测定药用植物黄苓基因组大小 张琳琳1 ，曹博1 ，白成科口 (陕西师范大学生命科学学院，西安 710062;2西北濒危药材资源开发国家工程实验室，西安 710062) 摘要:为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小(或称C值)的方法，分别以 新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料，采用 Otto 和LBOl 两种细胞核提取液，利用流式细胞术对黄苓C值 进行测定。结果表明，选用豌豆为内标植物时，相比LBOl 一步法，0忧。两步法在低温提取、离心和保存 条件下，琪化丙吱染色浓度为0.02mg/mL，得到的细胞核散点图相对集中，碎片较少，容易准确取门 ， CV 较小。不同提取材料表明，幼嫩叶片和新鲜叶片利用 Otto 二步法均能得到高质量的细胞核悬液，细胞 核数量多且散点图集中，有利于取门和测定的C值更准确。而干燥叶片提取的细胞核得到的散点图分 散，无法准确取门和测定C值。最终，系统地优化了利用流式细胞术测定药用植物黄苓基因组大小的方 法，并首次成功测定黄苓lC值为0.58 pg ，基因组大小约为562 Mbp。这一研究结果，将为了解黄苓的基 因组值大小和利用流式细胞术测定其他药用植物C值提供参考，并将为黄苓属药用植物资源的遗传评 价和保护利用等研究奠定基础。 关键词:黄苓;0忱。 ;LB01; 流式细胞术;C值 申图分类号:Q37 文献标志码:A 论文编号:2013-0561 The Detection of Genome Size of Medicinal Plant ScuteHaria baicalensÎs Georgi by Flow Cytometη 12 Zhang Linlin\ Cao Bo\ Bai Chengke • (Gollege ofLife Sciences, Shaanxi Normal University, Xi 四71∞62; 2Nω， ional Engineering Laboratoryfor Resource Developing ofEndangered Ghinese Grude Drugs in Nor伽lJωestofCωhi阳， Xian71∞62) Abstract: To discuss and optimize the methods of estimating nuclear DNA content of medicinal plants by flow cytometry (FCM) , fresh leaves , younger leaves and dry leaves by silica were taken as samples and Otto s buffer and LBOl buffer were used to estimate the C-value of Scutellaria haicalensis Georgi by FCM. The results showed that better results were easily and accurately gotten with relatively concentrated scatterplot, less debris , more simplicity to take gates and lower CVwhen using Otto s buffer with two-steps method to extract, prep缸e