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第36 卷 分析化学(阳NXI HUAXUE) 研究报告 第6 期 Chinese Journal of Analytical Chemislry 729 町734 2∞8 年6 月 微板式化学发光酶免疫分析法临床测定人血清中孕酣 任世奇1 王栩..2 唐宝军3 胡国茂3 李振甲3 陈国南1 林金明2 I (福州大学化学化工学院，福州 35仅归) 2( 清华大学化学系，北京 1【刷刷) 3( 北京科美东雅生物技术有限公司，北京 1α胁的 摘 要将抗兔IgG(即二抗)物理吸附于聚苯乙烯微孔板上作为通用固相，通过免疫反应制备固相抗体。采 用辣根过氧化物酶催化鲁米诺·过氧化氢化学发光体系，建立了一种高通量、简便、快速的化学发光酶免疫分 析方法用于临床测定人血清中的孕酬。对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、发光底物选择、发光反应时间 及温育条件等进行了考察和优化，最终选定的实验条件:孕嗣抗体和 HRP 标记物的最佳稀释度分别为 1: 100000 和 1: 15α肌选用E 号发光底物，发光反应 10 min 后测定;37 c水浴条件下温育 I h。对建立的方法 进行了评价。该方法的灵敏度为0.08μ.gIL;批内和批间相对标准偏差均在 15% 之内;低、中、高 3 个不同浓 度值样品的平均回收率分别为 1019岛、 101% 和 94.4%( 在 87.8% -1089岛之间)。使用本方法和经典的放射 免疫法同时对36 份人血清样品进行测定，结果显示，本方法与放射免疫分析方法相关性良好，其相关系数为 0.95归。 关键词 孕圃，人血清，化学发光酶免疫分析，辣根过氧化物酶 1 引言 孕酣(progesterone) 亦称黄体圃，是天然的孕激素，由卵巢和胎盘产生，分子量为314 D ，它与雌激素 共同维持女性生殖周期及女性生理特征[1] 。动态监测血清中的孕酣含量，有助于判定排卵期，了解黄 体功能，研究各种类固醇避孕药及抗早孕药的作用机理[υ] 。此外，近年来研究表明，孕酣的作用已远 超出生殖功能的范畴，它不仅可在神经系统中合成分拙，还能影响神经系统的结构和功能[4] 。孕嗣对 脑损伤保护作用的实验研究及作用机制已成为目前的研究热点之一[s] 。 由于孕酣对人身心健康的重大影响，医学、生物、环境及食品安全等各领域对该物质进行了深入研 究，并建立了多种测定方法。目前孕酣的检测方法大致可以分为两类:色谱法和免疫分析法。色谱法作 为检测血清中孕酬的标准方法[6.7] ，在准确性、选择性、重现性、灵敏度等方面具有无可比拟的优势，但 同时也存在一些局限性:如仪器昂贵，操作技术要求高，需要复杂的样品前处理等。因此，在临床检测 中，色谱法不能满足快速、简便、低成本、高通量的要求。而免疫分析方法具有特异性好、简便、低成本等 优点，是目前临床检测孕嗣的主要方法。放射免疫分析(radioimmunoassay , RIA) 川、酶联免疫分析 ( enzyme linked immunoadsorbent assay , E LlSA) [圳、荧光免疫分析( fluoroimmunoassay , FIA) [10] 、时间分 辨荧光免疫分析(time resolved fluoroimmunoassay , TRFIA) [11] 和化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoass町， CLIA) [12] 用于人血清中孕酣的检测都有报道。 RIA 使用放射性核素，污染环境，有效期 短，测量时间长，这些缺点限制了其进一步的应用。 ELlSA 和 FIA 的灵敏度较低，不利于血清中低浓度 孕酣的测定。 TRFIA 和 CUA 克服了以上方法的缺点，国外已经实现了分析技术完全自动化，但这些进 口的诊断试剂往往需要专门配套的仪器，试剂、仪器价格昂贵;此外，其专利保护也限制了这些技术在我 国国内的研发。 化学发光酶免疫分析法(chemiluminescence enzyme immunoassay , CLEIA) 综合了免疫分析和化学发 光检测的优点，具有特异性高、操作简便快速、高通量以及仪器简单价廉等特点M-16] ，是