微板式化学发光酶免疫分析法测定人血清中癌胚抗原.pdfVIP

第 36 ~接 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第8 期 2∞8 年8 月 Chinese Journal of Analytical Chernislry 1056 -10ω 微板式化学发光酶免疲分析法测定人血清中癌胚抗原 辛天共1 ， 2 王栩2 靳辉1 ， 2 1非景辉3 梁淑轩1 李振甲3 林金明 *2 I (惆北大学化学与环境科学学院，保定 071002) 2( 清华大学化学系，北京 l∞084) 3 (;f~京科荣东雅1::物技术有限公司，;f~~ 1似泊94) 摘 黯 采用辣根过氧化物酶(HRP)催化鲁米诺(lurninol) 耐2 02 化学发光体系，建立了一种测定人血清中癌 胚抗原(CEA) 的高灵敏度、高特异性、简便快璋的微板式化学发光酶免疫分析方法。对免疫反应条件、酶结 合物稀释脏、发光反应时间、封闭液等进行了考察和优化。采用双抗体夹心法，室温静囊 I h ，榄涤腊加入 1ωμL 发光1版物液，10 rnÎn 后检测。该方法的结饨相关系数为0.9998;最低检tH 限为0.57μglL;批内和批间 变异均在 10% 之内;低、中、高3 个不同浓度值样品的平均阴收率分别为 107.4% 、93.3% 和 104唰 5% 。使用本 方挫与进口发光试剂盒对40 份人血清样品进行测定，结果表明，本方法显示了良好的相关性，其相关系数为 0.9115 表明本分析体系稳定可靠，可用于商品化诊断试剂盒的开发和应用。 0 关键词 化学发光脚免疫分析，赚根过氧化物脚，癌胚抗牒，人血清 1 号! 癌脏抗原(carcinoembryonic antigen , CEA) ，是Gold 和 Freedman 于 1965 年从结肠癌和胎儿结肠粘 腰组织中发现的一种糖蛋白抗原，曾认为是结肠癌的特鼻性抗原[1 ， 2] 0 CEA 是一种分子量为 200 kDa 的糖蛋冉，蛋向质含量约40% -45% ，其余组成包插岩藻糖、甘露醇、半乳糖及陷在被酸。健康成年人血 清中 CEA 浓度约在2.5 叫 5.0μg1L 之间iM10 在l临床诊断中，CEA 被认为是结/直肠癌的特异性肿瘤标 忠物，同时还可辅助除断其它恋性肿瘤，特别是在肺癌、乳腺癌、胃痛、肝楠、卵巢癌、膀脱癌、前列腺肿 瘤、淋巴瘤等患者血清中含量明、盟增商[5410 肿瘤患者血清 CEA 含量增南程度与肿瘤转移具有一定的 相关性[9] 。近年来临床已将 CEA 作为胃肠道肿瘤的惨断、治拧和预盾的监测指标。定期枪栅 CEA;可 帮助临床分析治疗效果、判断预脂及糊知篇发、转移[9 ， 10] 。此外，CEA 浓度在某些非肿瘤引发疾病患 者、吸烟者以及某些炎症患者的血清中均见升高[ll] 。 免疫分析法作为一种廉畏的分析方法巳广程应用于临床诊断和生物、化学等方阔的研究中[口]。常 用癌胚抗原检测的方法有放射免疫分析法(radioimmunoassay , RIA) [凹，14] 、酶免疫分析法(enzyme linked immunoadsorbent 制say ， EUSA) [15 ， 16] 、时间分辨荧光免疫分析法(time resolved fluoroimmunoassay. TR- FIA) [口， 18] 和化学发光免疫分析法(chemiluminescence immuno脚呵， CLIA) [19] 等。化学发光免疲分析法 具有特异性强、灵敏度高、咒放射性污染、操作快速简便及易于自功化等优点H94i ，已受到广大科研t 作者和临床分析工作者的关注。 本研究建立了一种测定人血清中 CEA 的化学发光免瘦分析法。采用 HRP 催化 luminol-H 02 化学 2 发光体系，详细研究了标记反应、观抗体夹心免疫反应和化学发光反应的条件，同时对该方法的准确度、 精密度、特异性、线性范围、检出限及稳定性等指栋进行了测定和评价。本方法用于临床人血清样品分